棉花农杆菌介导的转基因体系建立

被引量 : 7次 | 上传用户:mqs129977
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
根癌农杆菌介导法是棉花遗传转化的最常用方法。陆地棉常用的受体有下胚轴、子叶、茎尖和棉花的胚性愈伤组织等。以下胚轴为受体的农杆菌介导法是最成熟的转化体系,但是转化周期较长,至少10-12个月;农杆菌介导法转化棉花胚性愈伤组织,不但可以缩短转化周期,而且能够降低工作量,最终提高转化效率,但是获得的转基因苗会出现高频的变异;以茎尖作为受体的转化体系属于器官发生的再生过程,会出现嵌合体现象。本研究首先选取新陆早45号的下胚轴作为外植体,经过愈伤组织诱导、胚性愈伤组织培养、胚状体形成和小植株的获得等实验,成功建立了棉花再生体系;在此基础上选取新陆早33号的胚性愈伤组织为受体,将SM基因进行遗传转化,经过抗性筛选和胚胎发生,获得转基因小苗,于温室嫁接成活;同时,尝试选成熟胚作为受体,进行转化,经过约20-30d的抗性筛选,获得了转基因小苗,是一种不依赖于组织培养的一种转化方法。具体的研究结果如下:1、以传统再生体系为基础,选取新陆早45号下胚轴作为外植体进行组织培养,建立了高效的再生体系。(1) MS+0.1mg.L-12,4-D+0.1mg.L-1KT+1.9g.L-1KNO3+0.75g.L-1MgCl2+30g.L-1葡萄糖+2.0g.L-1Gelrite是适合愈伤组织增值培养基,利用该培养基,愈伤组织的诱导率为88.5%。(2)待愈伤组织增殖到5-7mm时,进行胚性愈伤组织诱导,约2-3次继代会出现胚性愈伤组织,观察发现颜色为浅绿、灰绿到黄绿,质地疏松的愈伤组织容易分化出胚性愈伤组织,分化率为73%。(3)挑出单个胚性愈伤组织进行胚状体诱导,进一步再生小苗,最终得到了16株再生小苗。整个周期约5-7个月。2、在建立上述棉花高效再生体系的基础上,通过农杆菌介导法将棉花的SM基因转化到新陆早33号的胚性愈伤组织中,经过抗性筛选、分化培养和胚胎发生等阶段,获得了10棵转基因小苗。整个转化周期5-7个月,提取这些转基因小苗的DNA,PCR检测SM基因的阳性率是77%。3、在以成熟胚为受体的再生与转化实验中,首先从筛选出最合适的品种出发,选用四个陆地棉的种进行试验,结果发现四个品种的瞬时表达率没有差异,但新陆早45号的转化率比其他三个品种高出10-20%。同时对农杆菌菌液的浓度,侵染时间,卡那霉素筛选浓度,AS和以及表面活性剂有无等条件进行了实验。实验表明,OD值在0.6,侵染时间为15min,卡那霉素筛选浓度为100mg/L,侵染时加入AS和Silwet-77,转化效率最高,高达25%。最终得到转基因植株28棵。转化周期为1个月左右,阳性率为32%。本研究建立了以胚性愈伤组织和成熟胚为受体,农杆菌介导转化的产生转基因棉花的方法,经分子验证(GUS染色、PCR)和点涂卡那霉素,成功将SM基因导入了新陆早33号和陆地棉WC,为棉花转基因研究提供一种新的方法。
其他文献
为弥补军方在某些政策相关领域基础性科研的不足,以及重塑军方与社会科学界的关系,美国国防部于2008年推出"密涅瓦"计划。该计划由国防部资助地方院校对一些美国军方关注的领
盐场管理制度建设是历代盐业管理的重要内容之一,同时也是其他一切盐业问题的基础。明清时期,两淮盐场执天下盐场之牛耳,其历史变迁是整个明清时期盐业发展的一个缩影。因此
在经济全球化和区域一体化时代,单枪匹马参与市场竞争已不是明智之举。在改革开放不断深入的宏观背景下,区域经济关系逐步趋向市场化。长江中游城市群的旅游业逐步走向于区域
<正>由于缺乏有效管理保护,不到一年时间里,贵州多处古老苗寨侗寨发生多起火灾。贵州省政协委员李梓呼吁抓紧保护和挽救消逝的古村落。她说,不少地方破坏古村落的同时还仿建
目的主要是观察优质护理干预在妇产科护理中的效果,最终目标就是最大限度提高医院护理人员对产妇的护理质量。方法选取我院2015年5月~10月收治的产妇共100例。根据入院先后顺
郴州特色优质烟开发之所以取得明显成效,离不开适宜的生态条件、有利的外部环境和政策支持,从选种、育苗、施肥、病虫害防治到烘烤的配套技术培训方面的组织管理制度.今后要
肥胖症(Obesity)是由遗传、环境等因素共同作用产生的慢性代谢疾病,会导致心血管疾病、高血压、高血脂、2型糖尿病、中风、癌症等疾病的产生。肥胖发病率的连年攀升,已成为全
负热膨胀或近零膨胀材料在航天航空、精密器械和光学器件等领域具有重要应用前景。本文报道了一种分子式为HfFeMo2VO12的新型近零膨胀材料。研究结果表明,HfFeMo2VO12在低温
中国和日本一衣带水,唇齿相依,在文化上表现出诸多的相似性。从古至今,中国和日本都有集团主义的历史文化传统,但也因国家、民族、文化、地理的不同,而使得两国的集团主义有
目的观察加减辛夷散冲洗液术后应用对内镜鼻窦手术(ESS)疗效的影响.方法将262例(499侧)慢性鼻窦炎、鼻息肉内镜手术后患者随机分为治疗组(加减辛夷散冲洗液组)和对照组(复方