黄连麦冬提取物对体外培养大鼠结膜杯状细胞增殖作用及有效成分配伍筛选的实验研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dianshenshizhe
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目的:(1)建立SD大鼠结膜杯状细胞(Rat Conjunctival Goblet Cells,RCj-GCs)体外常规培养模型;(2)观察黄连麦冬五种提取物干预RCj-GCs 48h的增殖活性;(3)观察有效成分配伍对RCj-GCs分别干预24h和48h的增殖活性;(4)观察有效成分配伍对RCj-GCs干预48h细胞周期的影响;(5)观察有效成分配伍对RCj-GCs干预48h细胞粘蛋白分泌的影响。方法:(1)组织块原代培养法培养细胞并用组化和免疫组化鉴定细胞;(2)将五种实验药:黄连多糖(CP)、黄连生物碱(CA)、麦冬多糖(DLP)、麦冬高异黄酮(DLI)、麦冬皂苷(DLS),分别溶解并稀释为8个实验组,终浓度分别为10g/ml、5 mg/ml、1mg/ml、0.2 mg/ml、0.04 mg/ml、0.008 mg/ml、0.0016 mg/ml、0.00032 mg/ml,通过MTT法检测8个组对RCj-GCs干预48h的增殖活性;(3)MTT法检测有效成分配伍对RCj-GCs干预24h和48h的增殖活性;(4)流式细胞仪检测配伍干预RCj-GCs48h细胞周期的变化;(5)以考马斯亮蓝G-250(CBBG)染色法检测配伍干预RCj-GCs48h细胞粘蛋白分泌量的变化。结果:(1)原代培养7-10天能够培养出RCj-GCs,经AB/PAS双染和免疫组化鉴定为RCj-GC5。(2)CP1mg/ml、DLI1mg/ml和DLP0.00032mg/ml对RCj-GCs增殖活性明显高于对照组(P<0.01)。(3)配伍各组对RCj-GCs干预24h增殖活性明显高于阴性对照组和阳性对照组(P<0.01);组Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ对RCj-GCs干预48h的增殖活性明显高于阴性对照组(P<0.01);组Ⅰ对RCj-GCs干预48h的增殖活性明显高于阳性对照组(P<0.01);组Ⅲ对RCj-GCs干预48h的增殖活性明显高于阳性对照组(P<0.05)。(4)各个配伍组均未明显促RCj-GCs凋亡;组ⅠG2/M期和组ⅢS期的细胞比例高于阴性对照组(P<0.05);组ⅠS期细胞比例高于阴性对照组(P<0.01);组ⅠG2/M期细胞比例高于阳性对照组(P<0.05)。(5)各配伍组干预RCj-GCs48h细胞粘蛋白分泌量与对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论:(1)体外成功建立RCj-GCs常规培养模型,并鉴定为RCj-GCs; (2) CP1mg/ml、DLI1mg/ml和DLP0.00032mg/ml对RCj-GCs有良好的促增殖作用;(3)配伍组Ⅰ和Ⅲ有良好的促RCj-GCs增殖的作用;(4)配伍组Ⅰ和Ⅲ能够促进细胞有丝分裂和增殖;(5)配伍各组对细胞粘蛋白的分泌无明显抑制作用。
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