论文部分内容阅读
目的探讨高糖对人视网膜色素上皮( hRPE)细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮源性生长因子(PEDF)的干预作用以及p42/p44丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases MAPK)信号转导通路特异性抑制剂PD98059在高糖诱导的hRPE细胞VEGF表达中的作用。方法采用hRPE细胞株,第一部分:分为1.正常糖浓度组(NG,5.6mmol/L葡萄糖),2.高糖组(HG1:15.0mmol/L葡萄糖;HG2:20.0mmol/L葡萄糖;HG3:30.0mmol/L葡萄糖),3.高渗组(HM,24.4mmol/L甘露醇+5.6mmol/L葡萄糖);第二部分,在各糖浓度组基础上应用p42/44MAPK特异性抑制剂PD98059处理细胞。分组如下1.PD98059组: 20.0umol/L PD98059+HG1(HG1+P)、HG2(HG2+P)、HG3(HG3+P),2.另设一组溶剂对照组(DMSO组),以排除DMSO的影响,DMSO组:0umol/L PD98059+HG1(HG1+D),应用逆转录PCR(RT-PCR)检测各组hRPE细胞VEGF及PEDFmRNA的表达。应用ELISA检测各组hRPE细胞上清液中VEGF蛋白的表达。结果(1)应用RT-PCR方法检测24小时HG1、HG2、HG3、HM组细胞VEGF/β-actin吸光度比值分别为0.77±0.0208,0.84±0.0153, 1.06±0.0902, 0.80±0.0351 ,各高糖组和甘露醇高渗组与NG组0.69±0.0351相比,P<0.05。应用ELISA方法检测48小时各组细胞VEGF表达量(ng/L),其结果与mRNA一致。(2)应用RT-PCR检测HG1、HG2、HG3各组细胞上清中PEDF/β-actin吸光度比值分别为1.96±0.1050, 1.63±0.1253, 1.11±0.0902,各实验组与NG组2.77±0.1159相比,P<0.05。(3)15.0mmol/L高糖培养人RPE细胞,应用RT-PCR方法检测0、12、24、36、48和60h培养的人RPE细胞VEGFmRNA含量(AVEGF/A?-actine )分别为:0.33±0.0764、0.57±0.0839、0.77±0.0208、1.91±0.0902、1.76±0.0777、1.82±0.1015,各时间点VEGF表达量与0h相比,P<0.05。应用ELISA方法检测各时间点细胞上清中VEGF蛋白含量(ng/L),其结果与mRNA一致。(4)应用RT-PCR方法检测PD98059及DMSO处理组(NG+P、HG1+P、HG2+P、HG3+P、HG1+D)VEGFmRNA含量(AVEGF/A?-actine )分别为:0.50±0.0451、0.40±0.0433、0.67±0.0458、0.71±0.0503、0.73±0.1060,PD98059处理组和对照组相比P<0.05。应用ELISA方法检测PD98059及DMSO处理组上清中VEGF蛋白含量(ng/L),其结果与mRNA一致。(5)NG、HG1+P组VEGFmRNA/PEDFmRNA比值与HG1组相比,均P<0.05。结论高糖可从转录及蛋白水平诱导hRPE细胞VEGF的表达,并抑制PEDF的表达。P42/44MAPK信号转导通路可能参与了高糖诱导的hRPE细胞VEGF的表达。