【摘 要】
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[目的]:建立小鼠椎间盘体外培养退变模型,分析抗氧化剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)对椎间盘退变的影响。[方法]:选取8周龄ICR小鼠作为实验对象,无菌条件下取出小鼠腰段椎间盘,
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[目的]:建立小鼠椎间盘体外培养退变模型,分析抗氧化剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)对椎间盘退变的影响。[方法]:选取8周龄ICR小鼠作为实验对象,无菌条件下取出小鼠腰段椎间盘,随机分为三组:对照组、退变模型组及NAC处理组,在退变模型组中的培养基加入白细胞介素(IL)1β和肿瘤坏死因子(TNF)α,NAC处理组的培养基中除了加入上述炎症因子外,再加入配制好的NAC溶液。在培养液中经过不同时段培养后,分别于3天、7天、10天取出培养液中的椎间盘。通过组织学和免疫组织化学等方法分析椎间盘形态学特征,并提取椎间盘组织中的蛋白和RNA,分别通过Western-blot和RT-PCR方法检测椎间盘退变过程中的相关蛋白表达和基因转录水平。[结果]:与退变模型组相比,培养3、7、10天的NAC处理组椎间盘经HE-阿尔新蓝复合染色显示其结构逐渐分界清楚,蛋白多糖含量丰富;二型胶原(Col-Ⅱ)、十型胶原(Col-X)及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达均降低;抗氧化蛋白SOD-1表达升高,抗氧化相关基因GSR、Gpx4表达水平升高;增殖相关蛋白Cyclin D1表达升高;促凋亡蛋白Caspase-3表达降低,促凋亡相关基因nox A、Perp表达水平降低;NAC处理组上述各项指标均接近对照组水平。[结论]:通过在培养基中加入炎症因子IL-1β和TNF-α,可以成功建立椎间盘体外培养退变模型。抗氧化剂NAC补充可以通过降低氧化应激,促进细胞增殖,减少细胞凋亡延缓椎间盘退变。
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