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目的:探讨苦豆碱(Aloperine,ALO)在体外抑制前列腺癌(Prostatic cancer,PCa)细胞中的作用及其可能的分子机制。方法:1.购买人前列腺癌细胞(LNCaP和PC3)并进行细胞培养、传代、冻存,实验分组:control组、ALO(25μM)组、ALO(50μM)组、ALO(100μM)组、ALO(200μM)组、ALO(400μM)组、ALO(800μM)组、ALO(1600μM)组,采用CCK8法检测细胞活力,筛选ALO用药浓度。2.实验分组:control组、ALO(100μM)组、ALO(200μM)组,采用光镜观察细胞形态学改变;采用集落形成实验观察细胞克隆情况;采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡;采用免疫荧光技术检测自噬指标LC3Ⅱ表达;采用Western blot检测自噬(LC3Ⅱ、Beclin1、P62)和凋亡(Caspase3、Bcl-2、Bax)关键蛋白的表达水平。3.实验分组:control组、ALO(100μM)组、HCQ(20mg/m L)、ALO(100μM)+(HCQ20mg/m L)组,用自噬抑制剂氯喹(HCQ,20mg/m L)预处理PC3和LNCaP细胞1小时,然后用ALO处理PC3和LNCaP细胞48小时后,Western blot检测LC3Ⅱ、Beclin 1、P62、Caspase3、Bcl-2和Bax的蛋白表达情况。4.实验分组:control组、ALO(50μM)组、ALO(100μM)组、ALO(200μM)组,Western blot检测PI3K/AKT/m TOR信号通路关键蛋白的表达。结果:给予PC3和LNCaP不同浓度ALO干预后,CCK8和集落形成实验均提示ALO以浓度依赖性方式抑制PC3和LNCaP的细胞活力,且计算得到PC3和LNCaP两种细胞的IC50值分别为180±10μM和140±10μM。用ALO(100或200μM)处理PC3和LNCaP 24、48、72和96h,ALO也以时间依赖性方式抑制PC3和LNCaP细胞活力(P<0.05)。用ALO(100或200μM)处理PC3和LNCaP 48小时;免疫荧光检测显示ALO 100、200μM组较control组LC3Ⅱ胞浆位置绿色荧光点状表达数量增多,荧光强度增加;Western blot结果显示,与control组比较,ALO 100、200μM组细胞LC3Ⅱ、Beclin1、Caspase3和Bax蛋白表达水平增高(P<0.05),而P62和Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。自噬抑制剂氯喹(HCQ,20mg/m L)预处理1h后,再用ALO(100μM)处理PC3和LNCaP 48 h;与ALO(100μM)组比较,两种细胞系ALO(100μM)+HCQ(20mg/m L)组LC3Ⅱ、Beclin1蛋白表达水平均降低(P<0.05),而凋亡指标Caspase3、Bax表达水平明显增高(P<0.01)。此外,用ALO 50、100和200μM处理PC3和LNCaP 48 h,与Control组比较,ALO 50、100和200μM组PI3K、AKT和m TOR蛋白表达均无明显差异(P>0.05),50μM组PC3和LNCaP两种细胞的P-PI3K、P-AKT和P-m TOR蛋白表达无明显差异(P>0.05),100μM组PC3和LNCaP两种细胞的P-PI3K、P-AKT和P-m TOR蛋白表达降低(P<0.05),200μM组PC3和LNCaP两种细胞的P-PI3K、P-AKT和P-m TOR蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:1.苦豆碱通过促凋亡、自噬的作用抑制PC3和LNCaP的生长;2.抑制细胞自噬水平可降低苦豆碱致PC3和LNCaP凋亡活性;3.苦豆碱可能通过抑制P I3K/AKT/m TOR信号通路促细胞凋亡和自噬,从而抑制PC3和LNCaP增殖。