论文部分内容阅读
本实验是基于肿瘤干细胞源于正常干细胞这一假说，猜测癌细胞微环境可能影响正常干细胞的形态学特征和基因表达，使之朝肿瘤干细胞方向转化。因此设计人诱导多能干细胞（human induced pluripotent stem cells，hiPS cells）和人非小细胞肺腺癌细胞A549细胞共培养。 研究目的:观察人iPS细胞在与A549细胞进行Transwell嵌套间接接触共培养和直接接触共培养前后的形态学变化，并检测两种共培养前后人iPS细胞9种相关基因的表达水平，初步探究人iPS细胞在A549细胞诱导下的形态及相关基因表达量的变化。 研究方法:(1)A549细胞的优化培养，使其达到增殖生长的良好状态。 (2)人iPS细胞的优化培养，使其达到增殖生长的良好状态。应用的是无饲养层培养法。 (3)间接接触共培养:将人iPS细胞培养在孔板中，上方放置Transwell小室，而A549细胞按照一定密度种植于Transwell小室的滤膜上，这样A549细胞所分泌的因子就可以通过滤膜渗透到人iPS细胞的培养环境中。 (4)直接接触共培养:将A549细胞经过丝裂霉素C处理，使其既不再分裂又具有正常的代谢能力，而后将处理过的A549细胞铺于培养板事先铺好的基质胶上，待细胞贴壁后再将人iPS细胞按照一定的密度种植其上，进行一段时间的直接接触共培养。 (5)2周后观察人iPS细胞形态变化并收集人iPS细胞检测分析某些基因的表达量变化。本实验中选取的分析基因为人iPS细胞的6种转录因子Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc、Lin28、Nanog和与A549细胞相关的3种因子ABCG2、CD133、 CD44。 研究结果:人iPS细胞在间接接触共培养后，克隆松散，少量细胞有向A549细胞形态分化的趋势，ABCG2、CD44基因表达量稍有增加，其它基因表达量变化不明显;在直接接触共培养后，克隆松散，形状变化不明显，ABCG2、CD44基因表达量明显增加，其它基因表达量变化不明显。提示在共培养实验中A549细胞对人iPS细胞的生长产生了影响。