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【背景】目前全世界有10%-15%的夫妇受到不孕不育的困扰，其中40%-50%是由于男方因素引起，全球范围男子生殖能力呈明显下降趋势。导致男性不育的病因十分复杂，生育相关基因的缺陷是重要原因之一。线粒体是精子中唯一的细胞器，经典的理论认为线粒体通过氧化磷酸化产生三磷酸腺苷（adenosinetriphosphate，ATP）供给精子能量。虽然线粒体产能对精子运动和功能的重要性还存争议，但在异常精液中确实发现了精子线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）的突变、缺失及精子结构的异常。近年来，关于精子mtDNA的研究引起人们的广泛关注，但研究主要集中在基因的突变与缺失上，拷贝数的研究较少，不过也有学者提出可以通过测定mtDNA的拷贝数评估线粒体的功能状态。【目的】本研究的目的是通过比较不同质量精子mtDNA拷贝数及完整性差异，探讨精子mtDNA拷贝数和完整性与精子质量的关系，以及精子mtDNA对男性生育能力的影响。【方法】实时荧光定量PCR(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction，Real-time PCR)技术是一项已经发展成熟的研究手段，广泛应用于分子生物学和细胞生物学研究领域，具有快速、灵敏、准确的特点，能定量检测目的基因拷贝数及表达量的变化。本实验采用Percoll非连续密度梯度离心法将精液样本分为30%层精子和80%层精子，应用Real-time PCR技术定量分析不同质量精子各层mtDNA拷贝数。同时应用长链PCR技术测定不同质量精子80％层mtDNA完整性。【结果】52例精液样本中，正常组30%层精子mtDNA拷贝数（4.85±3.00）与其80%层精子（0.80±0.45）比较，差异有统计学意义（P<0.01）；弱精子症组30%层精子mtDNA拷贝数（1.92±1.29）与其80%层精子（0.70±0.52）比较，差异有统计学意义（P<0.01）；少精子症组30%层精子mtDNA拷贝数（13.33±9.96）与其80%层精子（1.52±0.68）比较，差异有统计学意义（P<0.01）；少弱精子症组30%层精子mtDNA拷贝数（5.34±4.62）与其80%层精子（1.93±0.65）比较，差异有统计学意义（P<0.05）。在80%层精子中，少精子症组（1.52±0.68）与少弱精子症组（1.93±0.65）mtDNA拷贝数与正常组（0.80±0.45）比较，差异有统计学意义（P<0.01）；少弱精子症组（9.33±2.71）mtDNA完整性与正常组（27.01±17.36）、弱精子症组（32.36±21.75）及少精子症组（17.63±7.64）比较，差异有统计学意义（P<0.01）。在30%层精子中，少精子症组（13.33±9.96）和弱精子症组（1.92±1.29）mtDNA拷贝数与正常组（4.85±3.00）比较，差异有统计学意义（P<0.05）。比较80%层精子各参数相关性， mtDNA拷贝数与mtDNA完整性呈负相关（r=-0.6261,P<0.01），mtDNA拷贝数与精子密度呈负相关（r=-0.6345,P<0.01），mtDNA完整性与精子密度呈正相关（r=0.5842,P<0.01）。【结论】质量差的精子中存在mtDNA拷贝数增加及完整性下降，mtDNA拷贝数的检测可能成为评估精子质量的一个指标。