论文部分内容阅读
盾壳霉(Coniothyrium minitans)是核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的重寄生真菌，在世界范围内广泛分布，在菌核病的生物防治中有着非常重要的作用。本论文对盾壳霉中的真菌病毒(Coniothyrium minitans RNA virus，CmRV)dsRNA基因组的分子生物学特性进行了研究。通过cDNA克隆和RT-PCR技术获得了该病毒dsRNA基因组的全长序列，共4975个碱基。序列分析表明该病毒仅有一条dsRNA片段，含有两个开放阅读框架(ORF)。ORF1位于该dsRNA的正链上62—2389nt，编码一个分子量为80344Da的外壳蛋白(Coat Protein, CP)；ORF2位于正链上2386—4875nt，编码一个分子量为82511Da的依赖于RNA的RNA聚合酶(RdRp)；位于2386—2389nt的四个核苷酸AUGA为两个阅读框架所共有，ORF1的终止密码子与ORF2的起始密码子相重叠。根据基因组的组成结构及序列分析，盾壳霉Chy-1菌株中的病毒(CmRV)可以归属于Totiviridae科，CmRV的dsRNA基因组结构和外壳蛋白及RdRp氨基酸序列同源性比较表明该病毒与寄生丝状真菌的Totivirus属的病毒之间的亲缘关系要更为接近。 本文同时还对CmRV的稳定性作了分析。从盾壳霉菌株Chy-1获得了100个单孢分离物，对它们的菌落形态进行了观察，发现在这100个单孢分离物与原始菌株Chy-1之间的菌落形态非常相似，随机挑选32个分离物进行检测，结果表明这些分离物中均含有与Chy-1菌株中大小相同的dsRNA片段。将盾壳霉菌株Chy-1的孢子埋于土壤中，两个月后用菌核为诱饵从土壤中分离到了8个分离物，这8个分离物都具有与Chy-1相似的菌落形态，并可检测到同样的dsRNA片段，Northern杂交证实这些dsRNA片段是CmRV的基因组。以上实验结果说明CmRV可以在盾壳霉稳定存在。 对28个盾壳霉菌株(其中5个菌株来自于英国，3个菌株为Chy-1经紫外线诱变而得)进行dsRNA检测，在其中12个菌株中检测到了dsRNA。Northern杂交结果显示在这12个菌株中的dsRNA病毒相互之间具有一定的同源性，这些病毒有可能属于同一个种，实验结果表明真菌病毒在盾壳霉中有可能普遍存在。