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目的:临床研究部分通过相关性分析,探讨不同病程中2型糖尿病患者血清IL-1β水平的相关因素;由于NLRP3炎症小体活化是IL-1β成熟与释放的重要途径,故基础研究部分通过体外实验,探究三黄汤主要有效成分(小檗碱、黄芩苷、大黄素和大黄酸)对RAW264.7细胞内NLRP3炎症小体活化的影响及作用机制。方法:临床研究部分严格按照纳排标准共收集江苏省中医院内分泌科病房收治的明确诊断为2型糖尿病的患者共205例,其中男性131例,女性74例;收集上述患者的一般资料(姓名、住院号、性别、年龄、病程、个人史等)、临床检验指标(糖代谢指标、脂代谢指标、肝肾功能指标等)及血清样本,以微珠流式免疫荧光发光法检测血清样本内IL-1 β的水平,通过相关性分析、克鲁斯卡尔-沃利斯检验、卡方检验等方式比较并分析不同病程中的2型糖尿病患者血清IL-1β水平的相关因素。基础研究部分以体外培养的RAW264.7巨噬细胞为研究对象,运用CCK8法检测不同浓度的小檗碱、黄芩苷、大黄素对巨噬细胞活性的影响。采用LPS/ATP联合刺激诱导巨噬细胞NLRP3炎症小体活化,并分别加入小檗碱、黄芩苷、大黄素进行干预,以免疫印迹法检测细胞裂解物内NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1p20蛋白的表达水平,以高内涵细胞呈像法对巨噬细胞内NLRP3蛋白进行免疫荧光呈像。结果:临床研究结果显示,在控制性别、年龄、用药史等混杂因素后,2型糖尿病的患者血清IL-1β水平与HOMA-β指数呈显著负相关。将纳入患者按2型糖尿病病程长短分组后,各病程组间年龄、病程、BMI、HOMA-IR、FCP、PCP 120min、TG、Urea、eGFR 及降压药用药史存在显著差异。在控制性别、年龄、用药史等混杂因素后,病程2-5年组患者血清IL-1β水平与eGFR呈显著正相关;病程大于10年组患者血清IL-1β水平与病程及ApoE呈显著正相关,与HOMA-β呈显著负相关。基础研究结果显示,2.5μM、5μM与10μM的小檗碱、黄芩苷、大黄素及大黄酸对RAW264.7巨噬细胞均无明显的毒性作用。高内涵细胞呈像及免疫印迹结果表明小檗碱、黄芩苷、大黄素、大黄酸对LPS/ATP联合刺激下RAW264.7细胞内NLRP3表达均有不同程度的抑制作用。免疫印迹结果显示大黄素及大黄酸处理对RAW264.7细胞内pro-Caspase-1蛋白表达存在抑制作用,而小檗碱或黄芩苷处理对pro-Caspase-1蛋白的表达无明显影响。免疫印迹结果显示小檗碱、黄芩苷、大黄素、大黄酸均可以抑制RAW264.7细胞内Caspase-1p20的表达。结论:病程小于等于5年的2型糖尿病患者血清IL-1β水平与eGFR呈正相关,由此推测2型糖尿病患者血清IL-1β水平可能与糖尿病肾病早期肾小球超滤具有一定关联;病程大于10年的2型糖尿病患者血清IL-1β与HOMA-β指数呈负相关,并可由此推测2型糖尿病患者血清IL-1β水平可能与胰岛β细胞功能进行性损伤具有相关性;病程大于10年的2型糖尿病患者血清IL-1β的升高还与病程发展及ApoE水平的升高密切相关,但具体意义有待进一步探究。三黄汤的4种主要有效成分:小檗碱、黄芩苷、大黄素、大黄酸均可以有效抑制LPS/ATP诱导的巨噬细胞NLRP3炎症小体活化;大黄素及大黄酸具有抑制巨噬细胞内pro-Caspase-1表达的作用,而小檗碱与黄芩苷对巨噬细胞内pro-Caspase-1的表达均无显著影响。