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本文以欧李3号、4号和5号三个优良品系为试材,建立了欧李茎尖组织培养快繁体系,并对影响离体叶片再生的因子进行了研究。结果表明:
1.欧李组织培养时茎尖采用0.1%HgCl2消毒7min效果较好。茎尖分化培养时采用MS培养基优于B5和改良White。欧李3号和5号茎尖接种在MS+BA0.50mg/L+IAA0.10mg/L、4号在MS+BA0.25mg/L+IAA0.10mg/L培养基上,萌发率达100%,成苗率高于70%。
2.试管苗增殖培养时,增殖系数随BA浓度的增加而提高。欧李3号和5号在改良2/3MS+BA0.50mg/L+NAA0.075mg/L培养基上,增殖系数分别为4.54和4.30;4号在改良2/3MS+BA0.40mg/L+NAA0.050mg/L培养基上,增殖系数4.50。增殖培养适宜的蔗糖浓度为3.5%,继代周期30-35d。欧李3号在改良MS+BA0.050mg/L+NAA0.075mg/L、4号在改良MS+BA0.025mg/L+NAA0.050mg/L、5号在改良MS+BA0.100mg/L+NAA0.075mg/L培养基上,幼茎粗壮、节间数多,叶片大而平展、叶色深绿,幼苗健壮,更利于生根培养。
3.试管苗生根培养时,幼苗基部茎段生根效果较好。欧李3号适宜的培养基为1/2MS+NAA0.20mg/L+IBA0.05mg/L,4号为1/2MS+NAA0.10mg/L+IBA0.05mg/L,5号为1/2MS+NAA0.20mg/L+IBA0.10mg/L,生根率分别为88.7%、91.9%和90.5%。培养基蔗糖浓度为1.75%更利于试管苗生根。欧李3号、4号和5号瓶外生根最适宜的NAA浓度为0.5mg/L,生根率达100%。试管苗瓶外生根较瓶内生根培养周期短,可简化程序、降低成本。
4.欧李试管苗移栽时,根长1.0-2.0cm成活率较高,达89.0%。移栽基质采用草炭:田园土:珍珠岩(5:2:1),瓶内生根苗成活率90%以上,瓶外生根苗达100%。
5.欧李叶片在MS+BA1.00mg/L+NAA0.75mg/L和MS+BA1.00mg/L+NAA0.50mg/L培养基上,再生率达40%以上。在叶片培养时,选择组培苗中部和基部叶片诱导不定芽再生的效果较好。暗培养对叶片再生无明显影响。