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目的:探讨乳腺癌细胞高表达的颗粒蛋白前体（progranulin,PGRN）对乳腺癌细胞肿瘤免疫的影响及其机制。方法:1.通过构建小鼠原位移植乳腺癌肿瘤模型,比较野生型（wild type,WT）与PGRN-/-型小鼠乳腺癌肿瘤组织大小及生存时间,免疫组织化学染色（immunohistochemistry,IHC）检测组织中M1、M2型巨噬细胞数量;采用蛋白质印迹技术（western blot,WB）、流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测经PGRN重组蛋白处理后,巨噬细胞RAW264.7细胞M1、M2标志物的变化;使用PGRN-si RNA处理RAW264.7细胞,通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测M1、M2标志物的表达变化;小鼠腹腔巨噬细胞（peritoneal macrophages,PMs）经脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）、IL-4刺激后,采用WB、PCR检测细胞表型。2.使用PGRN重组蛋白处理肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）,通过流式细胞术、免疫印迹技术、荧光定量PCR技术检测其表面程序性死亡配体1（programmed death ligand 1,PD-L1）的表达变化;WT、PGRN-/-型小鼠PMs经LPS或IL-4刺激后,通过WB、PCR检测其PD-L1的表达变化;采用免疫荧光技术（immunofluorescence,IF）检测巨噬细胞与PD-L1的共定位情况。3.PGRN处理TAMs后,通过WB检测TAMs中信号通路蛋白的表达;采用PGRN分别联合pSTAT3、pAKT、pERK抑制剂处理后,通过WB检测TAMs的PD-L1及M2标志物的表达。4.通过IHC分析WT型与PGRN-/-型小鼠乳腺癌组织中CD4、CD8、颗粒酶B的浸润情况;通过IF分析小鼠乳腺癌组织中CD8分别与肿瘤细胞CK19、巨噬细胞F4/80、M2型巨噬细胞标志物CD206、PD-L1的共定位;将小鼠脾脏T淋巴细胞分别与WT、PGRN-/-型小鼠PMs共培养后,通过FCM检测IFN-γ+CD8+T和Ki-67+CD8+T细胞的数量。5.采用IHC检测小鼠乳腺癌组织中的PD-1;采用IF检测在小鼠乳腺癌组织中PD-1分别与PD-L1、CD4、CD8的共定位情况;将小鼠脾脏T淋巴细胞分别与WT、PGRN-/-型小鼠PMs进行共培养,采用FCM检测PD-1+CD8+T细胞的比例;将PD-1、PD-L1中和抗体加入共培养体系中,通过FCM检测杀伤型CD8+T与增殖型CD8+T细胞比例变化。结果:1.PGRN-/-组的小鼠肿瘤体积更小,生存期比WT组长;IHC结果显示,在WT组小鼠乳腺癌组织中,F4/80+巨噬细胞及CD206+细胞数量更多,而PGRN-/-组的i NOS+细胞数量更多;WB与FCM结果表明,RAW264.7细胞经PGRN重组蛋白处理后,i NOS表达降低,而Arg1表达升高,并且PGRN能削弱LPS对M1的诱导,加强IL-4对M2的诱导作用。此外,PCR结果表明,PGRN-si RNA组的M1标志物（IL-12,TNF-α）表达升高,而M2标志物（Arg1,IL-10）表达降低;WB与PCR结果显示,与WT组相比,PGRN-/-组PMs高表达M1标志物（i NOS、IL-12、TNF-α）,低表达M2标志物（Arg1,IL-10）。2.FCM、PCR结果均表明,TAMs中PD-L1的表达依赖于PGRN的刺激浓度及时间;WB、PCR结果显示,PD-L1在WT组PMs中表达较高;IF结果表明,在WT组的乳腺癌肿瘤组织中,PD-L1与F4/80+巨噬细胞、CD206、Arg1均存在明显共定位。3.WB结果显示,TAMs经PGRN处理后,pSTAT3、pAKT、pERK蛋白水平均升高;PGRN联合pSTAT3抑制剂处理后,PD-L1及Arg1的表达均明显降低,但PGRN联合pAKT或pERK抑制剂时,PD-L1及Arg1的表达均无明显变化。4.IHC结果显示,PGRN-/-组小鼠乳腺癌肿瘤组织中CD4、CD8及颗粒酶B的数量更多,并且免疫细胞的表达在肿瘤实质中分布更多;IF结果显示,在野生组中,CD8细胞不仅与F4/80+细胞、M2型细胞分布在一起,而且与PD-L1也存在更明显的共定位现象。值得注意的是,PGRN-/-小鼠肿瘤组织中,CD8与肿瘤细胞CK19共定位明显增多;FCM结果表明,杀伤型CD8+T与增殖型CD8+T细胞在共培养体系中均减少。5.IHC结果表明,PD-1蛋白在WT组中含量丰富;IF结果显示,与PGRN-/-组相比,WT型组织中的PD-1与PD-L1、CD4、CD8均存在明显的共定位;FCM结果显示,共培养体系中的IFN-γ+CD8+T和Ki-67+CD8+T细胞比例,在使用PD-1、PD-L1中和抗体处理后均显著升高。结论:1.PGRN刺激巨噬细胞转变成M2,且PGRN能上调TAMs中PD-L1的表达。2.PGRN/STAT3通路调节TAMs的极化并上调PD-L1的表达。3.PGRN在乳腺癌组织中促进CD8+T细胞排除并抑制肿瘤免疫;PD-1/PD-L1轴介导PGRN促进乳腺癌的免疫抑制功能。