伊维菌素单克隆抗体的研制与应用

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阿维菌素类抗生素是一类应用广泛的广谱抗寄生虫药,主要包括阿维菌素(AVM)、伊维菌素(IVM)、多拉菌素(DVM)等,对体内线虫、体表寄生虫有很好的疗效,常用作兽医临床治疗及饲料药物添加剂。然而不规范用药会引起畜禽产品中药物残留,对人类的健康构成潜在威胁。国内外已经建立了多种检测伊维素残留的理化检测方法,虽然有些方法比较灵敏、精确,但由于方法复杂、耗时长、花费大、技术要求高等原因而不适合大批量样品的筛选。作为一种灵敏、快速、特异性强的方法,酶联免疫吸附测定法正逐渐应用于药物的残留检测。为探索一种能够快速有效的检测伊维菌素残留的方法,本研究采用单克隆抗体技术和酶联免疫吸附测定等技术,合成人工抗原,制备出抗伊维菌素单克隆抗体,建立了检测IVM残留的ELISA测定法。通过琥珀酸酐法、EDC法合成了IVM的2种人工抗原,用其中的IVM-BSA作为免疫抗原,通过杂交瘤技术获得1株能稳定分泌抗IVM特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株3D8。制备的腹水效价为1: 32000,蛋白浓度为18.7mg/ml,与其他抗菌药物的交叉反应率均低于0.1%。利用3D8杂交瘤细胞株的小鼠腹水单抗建立了检测IVM残留的间接竞争ELISA方法。采用包被抗原稀释度1:10000,腹水抗体的工作浓度32000,得到标准曲线线性方程为y=37.203x-33.698(10~2000ng/ml),半数抑制浓度为200ng/ml,检测限约为12ng/ml。标准曲线的批内变异系数为8.87%,平均批间变异系数为8.72%。初步应用于猪肝脏组织和肌肉组织的添加回收试验,样品经前处理后用于测定。建立ELISA标准曲线的线性方程为y=32.612x-23.445(10~1000ng/ml),样品回收率约为92%。
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