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目的:构建携带HBVx基因的慢病毒表达载体,感染14-19肝前体细胞使其稳定表达HBVx基因。通过门静脉注射肝前体细胞入动物体内,将HBVx基因导入动物体内后建立动物模型,分别检测小鼠各个组织中HBVx目的基因的表达情况,重点探讨在HBVx基因对肝脏的作用以及发生的一系列生物学变化。方法:(1)通过PCR扩增HBVx目的基因,使之与慢病毒表达载体(p Lenti-CMV-HA-3FLAG-PGK-EGFP-F2A-Puro)连接,后通过酶切、菌落PCR、测序验证质粒是否成功构建。(2)病毒构建成功后,感染14-19肝前体细胞,用嘌呤霉素(puromycin)连续筛选4周携带HBVx 14-19肝前体细胞,使用PCR、western blot进行细胞HBVx目的基因、蛋白质检测。(3)同时进行门静脉动物模型构建,分别在第3、7、14、30、60天用定量PCR方法进行检测小鼠各个组织器官中的HBVx的表达情况,同时使用酶联免疫吸附法测定小鼠血清内AFP和ALT的表达量。结果:(1)成功构建携带HBVx的慢病毒表达质粒,并用慢病毒(p Lenti-CMV-HA-3FLAG-PGK-EGFP-F2A-Puro)成功感染14-19肝前体细胞,通过使用嘌呤霉素(puromycin)连续四周的筛选,成功构建了稳定携带HBVx的14-19肝前体细胞。(2)成功构建门静脉动物模型。并分别于第3、7、14、30、60天用定量PCR方法进行检测小鼠各个组织器官中的HBVx的表达情况,发现HBVx只在在肝脏中表达,不在其他组织内表达;使用Elisa方法分别测定第3、7、14、30、60天的小鼠血清中AFP、ALT的表达含量,同对照组相比的结果显示,实验组小鼠血清内的AFP、ALT含量均升高。结论:携带HBVx的肝前体细胞可在体内稳定表达。通过检测各组织HBVx的表达量,说明HBVx具有嗜肝性,不累及其他脏器。构建了一个长期表达HBVx的动物模型,为本课题组后续研究HBVx导致肝癌发生发展的机制研究奠定了一个良好基础。