禽类脾脏位于血液循环的重要通路上又具有淋巴组织的结构,是机体独特的次级免疫器官。脾脏的特殊性使其既能够滤过血液中衰老坏死的红细胞、血源性微生物以及细胞碎片,又能够调节细胞免疫与体液免疫。而这些功能的有效发挥离不开血-脾屏障（blood-spleenbarrier,BSB）的支持。血-脾屏障是近年来提出的一种较新的免疫屏障,在哺乳动物中该屏障是位于脾脏边缘区动脉与静脉间的有效滤过床。禽类脾脏结构特殊,无边缘区但在白髓区域增添了椭球周围淋巴鞘（periellipsoidal lymphatic sheaths,PELS）的结构。实验室前期研究表明,鸡、鸭的BSB位于脾脏白髓椭球结构与PELS区域,也对鸡胚后BSB的发育进行了相关的研究。但与鸡相比,鸭BSB的结构中缺乏椭球相关细胞（ellipsoid-associatedcell,EAC）。再者,鸭为水禽且有两对淋巴结,鸡与鸭机体的免疫机制也有很大差异。鸭脾脏免疫功能的有序进行与胚后BSB的发育密切相关,但目前并没有相关研究。鸭坦布苏病毒（duck Tembusuvirus,DTMUV）是一种自2010年春夏之季在我国广泛传播的新型黄病毒,该病毒可导致鸭群出现食欲降低,生长迟缓,共济失调等症状。因DTMUV可引起蛋鸭产蛋量突然下降,卵泡出血、破裂,起初将该疾病称作鸭出血性卵巢炎。鸭坦布苏病毒不仅对产蛋鸭和肉用鸭有致病性,还能感染鸡、鹅、麻雀以及小鼠,是一种具有潜在威胁的人畜共患病。前人研究发现脾脏是该病毒的主要靶器官之一且日龄越小的畜禽越容易感染该病毒,但未见DTMUV引起不同日龄鸭BSB病变特征的详细研究。本研究先对胚后不同日龄鸭BSB结构和功能的发育进行研究,确定BSB何时发育完善。之后通过研究DTMUV感染后BSB未发育成熟的雏鸭和BSB发育成熟的成年鸭的脾脏病理变化的详细差异,探究完善的BSB抵御病毒的重要作用。本试验旨在为禽类免疫机制以及DTMUV发病与防治的研究提供一定的理论支持。试验Ⅰ鸭胚后BSB发育的研究脾脏是最大的次级淋巴器官以及免疫活动的重要部位,其中BSB在抵抗各种病原方面起着重要作用。鸭的BSB不同于鸡和哺乳动物的BSB。但目前没有关于鸭胚后BSB发育的相关报道。本试验通过光镜和电子显微镜技术对1、7、14、21、35、60和180日龄的鸭脾脏进行研究,以阐述BSB结构的发育。结果表明:鸭脾脏指数在1～14日龄不断增加。鸭出壳后,脾脏红、白髓界限不清晰,1～35日龄鸭脾脏椭球直径持续增长,PELS与动脉周围淋巴鞘（periarterial lymphatic sheaths,PALS）也逐渐发育。BSB的网状纤维随着年龄的增长而增加至14日龄形成紧密的三维网络结构。鞘毛细血管的内皮细胞于7日龄呈典型的立方型高内皮样结构,随着年龄的增长内皮细胞间出现明显的间隙。鞘毛细血管基底膜及其外周的胶原纤维也随年龄的增加而增厚增多。注碳试验结果显示,1日龄鸭脾脏只能阻挡部分碳粒,在鞘毛细血管外形成单层碳环。随着BSB功能不断完善,14～180日龄鸭脾脏可将绝大部分碳粒阻挡在椭球和PELS中,形成了双层碳环。总的来说,鸭BSB的结构与功能于胚后35日龄基本成熟,发挥着保护机体免受侵害的重要作用。试验Ⅱ DTMUV感染不同日龄鸭BSB的病变特征本试验旨在比较DTMUV感染BSB未发育成熟的7日龄雏鸭与BSB发育完善的180日龄成年鸭引起BSB及周围组织病理变化的具体差异。选用DTMUVXZ-2012纯化毒株,以105 TCIDso剂量腿部肌肉攻毒,感染后3、7、11天（days post-infection,dpi）收集脾脏并通过光镜和电镜技术进行研究。HE结果表明:3 dpi,两个日龄组鸭脾脏红、白髓界限模糊,椭球和PELS内细胞坏死,雏鸭脾脏损伤更严重;7dpi,成年鸭脾脏开始恢复,但雏鸭脾脏椭球周围仍有空泡变性的现象;11 dpi,成年鸭脾脏结构基本正常而雏鸭脾脏椭球和PELS结构仍不清晰。IHC结果表明:3～11 dpi,雏鸭脾脏内DTMUV 阳性反应比成年鸭强。网状纤维染色结果显示:3dpi,DTMUV引起雏鸭脾脏椭球壁、PELS区域网状纤维大量减少,比成年鸭严重;7～11 dpi,雏鸭BSB网状纤维的恢复比成年鸭慢。超微结构结果表明:3dpi,雏鸭脾脏内细胞核膜皱缩及细胞水肿都比成年鸭严重;7 dpi,DTMUV诱导两个日龄组鸭脾脏内细胞凋亡。11 dpi,雏鸭脾脏内部分细胞仍有脂质。总之,与成年鸭相比,DTMUV对BSB未发育成熟的雏鸭BSB及周围组织的损伤更严重,且雏鸭脾脏的恢复较慢。DTMUV可在体内诱导鸭脾脏内细胞凋亡,这为DTMUV发病机制的研究提供支持。