裙带菜是我国养殖的三大经济海藻之一,有较高的经济价值。养殖规模的不断扩大,迫切要求培育优良的新品系,以提高产量和品质。随着现代生物技术的发展,已经有可能采用一些先进的技术如单倍体克隆杂交、细胞质融合、转基因等进行育种,本文旨在研究裙带菜遗传育种中涉及的几个基础环节,为今后遗传育种的相关研究提供依据。 首先进行了裙带菜配子体原生质体的分离和再生工作,获得了 103～104个/ml的原生质体,并观察到再生的丝状体。其中,裙带菜配子体原生质体是采用自制的海螺酶分离得到的,尽管该酶是一种含有多种酶成分的粗酶,但是本文证明了它对裙带菜配子体细胞壁的酶解是有效的。其次,本文研究了适合酶解的条件,包括温度、pH、酶解时间,得到了合适的温度 20～25℃, pH 6～7,酶解时间 2～3 小时。此外,比较发现相同条件下雌雄配子体原生质体的产量差别不显著。 本文以裙带菜配子体为对象进行了超声波转化实验。首先研究了超声波作用对裙带菜配子体的影响,超声波处理对藻丝的生长有明显的促进作用,而且实验还发现研究了超声波对藻丝的剪切作用;另外,通过研究超声波对质粒 DNA 的影响,发现在 20-50W,10min 作用参数下,超声波对 DNA 无损害。染色结果发现,超声波转化裙带菜配子体易造成较严重的本底污染,在藻类转基因工作中应做慎重考虑。 最后,在筛选转化植株方面,本文研究了裙带菜雌雄配子体对不同筛选压力的敏感性实验,筛选压力包括四种抗生素,它们分别是卡那霉素、硫酸链霉素、氯霉素、潮霉素。结果表明裙带菜雌雄配子体对氯霉素和潮霉素敏感,对卡那霉素和硫酸链霉素不敏感。还发现雌雄配子体对氯霉素的敏感性存在显著性差异。 总之,本文研究了现代生物技术特别是转基因技术在裙带菜遗传育种中的一些相关问题,在转化受体方面研究了裙带菜配子体原生质体的分离再生;转化方法上,尝试了超声波转化方法;最后,在筛选标记上获得了适合转基因裙带菜配子体的筛选标记。