细菌菌群降解石油的影响因素及应用研究

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随着社会经济的发展,各国对石油的需求量日益增大,与此同时对生态环境也造成了极大的危害。生物修复技术,特别是微生物修复日益成为科学家研究的重点。本研究的主要目的是富集驯化获得石油降解细菌菌群,进而研究其修复性能。旨在为石油降解细菌菌群的获得方式提供理论依据,为将细菌菌群及其相应生物菌肥应用于实际的石油污染土壤修复提供基础。本文从天津市大港油田采集石油污染土壤样品,采用两种典型的富集驯化培养基,筛选能够降解石油的细菌菌群,并对细菌菌的数量及结构进行了分析;通过生长曲线试验,了解细菌菌群的生长特性;选取影响微生物生长繁殖的环境因素设计实验,从而获得在摇瓶培养条件下,各影响因素对细菌菌群降解石油的影响特性;最后通过室内试验,研究了细菌菌群对石油污染土壤的修复效果。研究结果如下:1.经过四个周期的富集驯化,从两个石油污染土壤样品中获得四种石油降解细菌菌群。通过降解性能实验得出,当初始石油浓度为5000mg/L时,采样点2经过无机盐加石油培养基富集驯化获得的细菌菌群对石油的降解率最高。2.通过对采样点2不同富集驯化培养基获得的菌群进行微生物数量测定及PCR-DGGE实验发现,无机盐加石油培养基更有利于微生物数量的增长,且微生物多样性高。3.对于同一石油污染土壤,不同富集驯化培养方式获得的细菌菌群的优势菌不同。无机盐加石油驯化得到的细菌菌群优势菌为鞘氨醇杆菌属(Sphingobacterium)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),牛肉膏蛋白胨加石油驯化得到细菌菌群优势菌为噬几丁质菌属(Chitinophaga)。4.通过影响因素试验得出,采样点2无机盐加石油驯化获得的细菌菌群在初始石油含量为3000~9000mg/L时,石油降解率较高(22.21%~28.08%);初始接种量为5%-11%,石油降解率为28.08%~31.36%;该细菌菌群有较强的耐盐性,在初始盐分含量为12g/L时,石油降解率为25.60%;该细菌菌群能够在中性偏碱性的条件下降解石油,有良好的应用前景。5.石油污染土壤修复实验表明,通过两种富集驯化获得的细菌菌群,当以菌液的形式投加到土壤中时,经过58d的修复,石油降解率达到40.9%~56.56%,高出CK灭菌组和CK未灭菌组28.69%~50.67%。说明外源细菌菌群的投加对石油污染土壤的修复起到了关键作用。6.土著微生物对外源微生物的影响与初始微生物的投加量有关。第二次投加外源细菌菌群后,并没有增大对石油的降解作用,这很可能与外源菌群在第二次投加后,由于土壤中营养物质消耗且室内温度开始降低,使其在土壤中的存活时间变短,对石油降解效率造成影响,故在考虑实际的应用时,应综合考虑投加量及气候条件。
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