BOULE蛋白的低复杂度结构域参与果蝇精子发生的研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fenglu84
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大量研究表明RNA结合蛋白在生物体生长发育以及配子形成过程中有着至关重要的作用。DAZ基因家族对于调控人类生殖发育至关重要,其果蝇基因同源物编码产物是RNA结合蛋白,特异性调控生殖细胞发育和精子形成过程。boule基因表达的改变或BOULE蛋白的缺乏可影响果蝇体内的多种活动进程,如参与神经网络信号通路、生殖细胞发育、配子细胞形成等。本文主要研究boule(bol)基因的低复杂度结构域(LC domain)对果蝇精子发生过程的调控作用,以及缺失LC domain对于蛋白聚集的影响,主要研究结果如下:1.通过Western Blot和免疫荧光染色对boule△LC突变体果蝇的表型分析及突变体果蝇RNA水平分析研究,我们发现boule△LC突变体雄果蝇(BOULE蛋白缺失LC domain)精子细胞数量减少且散乱排列,雄性不育,缺失LC结构域影响boule基因的RNA表达水平;2.以显微注射技术获得了boule基因的boule-RE、boule-RB、boule-RF(boule基因的剪接体)转基因果蝇,利用不同的特异性启动子系统,来挽救boule突变引起的减数分裂阻滞表型,发现全身过表达BOULE蛋白果蝇致死,利用睾丸特异性启动子系统β2-tublin来过表达boule-RF可以挽救boule基因突变表型直至形成精子细胞,而boule-△LC则完全不能挽救突变表型;3.通过制备TWINE抗体并检测了TWINE蛋白在boule△LC突变体果蝇中的表达,缺失LC结构域不影响TWINE蛋白的表达,验证了LC结构域可能与精子细胞成熟分化进程有关;4.利用过表达boule和boule-△LC质粒转染人293T细胞进行体外蛋白聚集验证实验,我们通过半变性凝胶电泳实验发现,BOULE蛋白的LC结构域在很大程度上影响了该蛋白在细胞中的聚集。
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