加味不忘散对血管性痴呆模型大鼠的认知功能及胆碱能系统的影响

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血管性痴呆(Vascular dementia,Va D)是仅次于阿尔兹海默症的第二大痴呆类型,患者的认知功能障碍严重影响了生活质量,也为家庭和社会带来了较重的负担,目前尚无治疗Va D的特效药物,本实验旨在探索一种新的中药复方——加味不忘散治疗Va D的可能性。目的:研究加味不忘散对Va D模型大鼠的学习记忆能力和认知功能的影响,探索加味不忘散对Va D模型大鼠胆碱能系统的影响,并揭示其作用机制。方法:将60只健康雄性SD大鼠(200g±20g)随机平均分为6组,每组10只,分别标记为假手术组、Va D模型组(简称模型组)、多奈哌齐组、加味不忘散低剂量组(简称低剂量组)、加味不忘散中剂量组(简称中剂量组)、加味不忘散高剂量组(简称高剂量组)。采用双侧颈动脉结扎术进行Va D模型的制备,其中假手术组仅将颈动脉分离,不结扎。术后10天,加味不忘散各治疗组分别给予0.05g/m L、0.15 g/m L和0.45 g/m L的加味不忘散溶液灌胃治疗;多奈哌齐组按0.5mg/kg给予盐酸多奈哌齐溶液;模型组、假手术组给予同等剂量的生理盐水灌胃。灌胃30天后,采用Morris水迷宫实验和旷场实验评价大鼠的学习记忆能力认知功能。行为学实验结束后,分离大鼠双侧海马组织,制备组织匀浆,采用Western blot方法检测组织中胆碱乙酰转移酶(Choline Acetyltransferase,Ch AT)及乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,ACh E)的含量。结果:1.行为学实验结果:(1)Morris水迷宫:定位航行实验中,各组大鼠的逃避潜伏期随着训练天数的延长呈现下降趋势。空间探索实验中,与模型组相比较,低剂量组无统计学差异(27.2±2.71 VS 23.78±3.14,P>0.05),而中、高剂量组在原平台象限停留时间百分比明显延长,差异具有统计学意义(28.58±2.57 VS 23.78±3.14,P<0.05;32.69±2.72 VS 23.78±3.14,P<0.01)。可视平台实验中,各组大鼠爬上平台所需时间及游泳速度均无统计学差异(P>0.05)。(2)旷场实验:与模型组相比较,低、中、高剂量组穿格次数增加,差异有统计学意义(80±10.28 VS 61.125±16.5,P<0.01;92.75±4.95 VS 61.125±16.5,P<0.01;111.75±7.8 VS 61.125±16.5,P<0.01),且随着加味不忘散浓度的升高,穿格次数也在升高。高剂量组与多奈哌齐组相比,穿格次数无统计学差异(111.75±7.8 VS 124.375±6.32,P>0.05)。2.Western Blot实验结果:(1)与模型组相比,低、中、高剂量组海马组织表达Ch AT的水平均提高,差异具有统计学意义(0.622±0.029 VS 0.442±0.058,P<0.01;0.715±0.035 VS 0.442±0.058,P<0.01;0.809±0.028 VS 0.442±0.058,P<0.01)。高剂量组与假手术组之间Ch AT的含量无明显差异(0.809±0.028 VS 0.84±0.033,P>0.05)。(2)与模型组相比,中、高剂量组大鼠海马组织中ACh E的含量降低(0.76±0.102VS 0.888±0.063,P<0.05;0.648±0.104 VS 0.888±0.063,P<0.01);与多奈哌齐组比较,高剂量组大鼠海马组织中ACh E的含量没有差异(0.648±0.104 VS 0.725±0.053,P>0.05);高剂量组与假手术组比较,两者之间无统计学差异(0.648±0.104 VS 0.598±0.033,P>0.05)。结论:1.加味不忘散可能改善Va D模型大鼠的学习记忆能力,且其作用呈剂量依赖性。2.加味不忘散可能呈剂量依赖性地升高Va D模型大鼠海马组织内Ch AT的表达水平,降低ACh E的表达水平。
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