论文部分内容阅读
目的:观察木豆叶提取物对去卵巢骨质疏松模型大鼠,HOS-TE85成骨细胞功能,矿化及破骨细胞分化的影响,从而探讨植物雌激素木豆叶提取物对更年期由于雌激素缺乏引起的骨质疏松的抑制作用。 方法: 1) 动物实验:雌性Wistar大鼠60只,体重232.7±11.0g。去除成年雌性大鼠双侧卵巢造成骨丢失型骨质疏松模型。动物分成6组:①假手术对照组(n=8);②骨质疏松模型组;③雌二醇组(0.5mg/kg);④木豆叶提取物32—1低剂量组(50mg/kg);⑤木豆叶提取物32—1中剂量组(100mg/kg);⑥木豆叶提取物32—1高剂量组(200mg/kg)。假手术组和模型组大鼠给予去离子水1ml/100g体重。大鼠卵巢切除两周后,开始给予木豆叶提取物或雌二醇或去离子水,灌胃1次/天,6天/周,连续8周。测定指标:体重、子宫重量和血清激素水平、骨病理切片检查,HE染色法观察股骨病理改变(骨小梁结构改变)。 2) 细胞实验: Ⅰ 木豆叶对HOS-TE85成骨细胞功能的影响:将细胞种于板中,第二天加药,E2(10-9M),木豆叶提取物(10-7,10-8,10-9g/ml)药物处理48h后,分别观察以下指标①细胞增殖(MTT);②3H-脯氨酸掺入:③碱性磷酸酶活性。 Ⅱ 木豆叶(10-8g/ml)长时程作用HOS TE 85成骨细胞18天后,去培养基,用福尔马林/甲醇/水固定。茜素红(AlizarinRed S,PH4.0)染色,用去离子水洗,晾干。显微镜下观察照相。茜素红染色以观察木豆叶对成骨细胞间质矿化的影响。 Ⅲ 木豆叶对破骨细胞形成的影响:处死大鼠,无菌下取股骨分离周围组织,切断股骨两端骨骺,D—Hanks冲洗骨髓腔,收集冲洗液,离心,加入预先配好的培养体系DMEM诱导培养基[20%FCS,1.25ng/ml GM-CSF,10-8M 1,25(OH)2VD3·]分别加入E2(10-9M),