MicroRNA186靶向YY1和CDK6抑制前列腺癌细胞增殖和肿瘤生长

来源 :厦门大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yjszf22222222
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:  目前的研究已经证实miRNA186在包括非小细胞肺癌、膀胱癌、胰腺导管癌等肿瘤中起着重要的调控作用,但是miRNA186与前列腺癌之间的关系目前还没有研究。本研究的目的主要是探究miRNA186对前列腺癌细胞生物学功能的影响,寻找miRNA186在前列腺癌细胞中作用的下游靶基因,探究其作用的机制。  方法:  首先通过荧光定量PCR的方法检测miRNA186在前列腺上皮细胞和3种不同前列腺癌细胞之间的表达情况,然后构建高表达miRNA186的重组质粒载体,通慢病毒转染和筛选获得稳定高表达miRNA186的前列腺癌细胞,荧光定量PCR检测其表达情况。通过体外的CCK8实验和流式细胞仪检测细胞周期实验来验证过表达miRNA186对前列腺癌细胞生物功能的影响,体内实验通过裸鼠肿瘤瘤球形成实验来验证过表达miRNA186对前列腺癌细胞成瘤能力的影响。在寻找靶基因实验中,结合数据库(Targetscan,miRanda,mirwalk,and Pictar)的预测结果,挑选10个可能的靶基因,首先通过荧光定量PCR检测这10个靶基因在过表达miRNA186的前列腺癌细胞和对照组细胞中的表达情况,挑选其中明显受到过表达miRNA186影响的靶基因,进行荧光素酶报告基因实验验证和Western Blot验证,寻找出miRNA186在前列腺癌中的靶基因。  结果:  1)荧光定量PCR结果显示miRNA186在前列腺癌细胞中明显地表达,在PC-3细胞中表达量最低。  2)CCK8实验表明过表达miRNA186能够明显抑制细胞的增值能力,通过流式细胞仪检测细胞周期后发现,过表达miRNA186的前列腺癌细胞PC-3中,G1期细胞数目明显变多,细胞分裂变慢。裸鼠肿瘤瘤球形成实验结果表明,过表达miRNA186能够明显抑制前列腺癌细胞PC-3的肿瘤瘤球的形成。  3)荧光定量PCR结果表明,在过表达miRNA186的前列腺癌细胞PC-3中,YY1,CDK6,MAP3K2和VEGFA基因的表达受到明显了抑制,通过荧光素酶报告基因实验结果发现,过表达miRNA186能够明显抑制YY1和CDK6基因的荧光素酶活性,最后的Western Blot实验结果表明,YY1和CDK6在过表达miRNA186的前列腺癌细胞中,蛋白表达明显受到抑制。  结论:  MiRNA186在前列腺癌细胞中低表达,过表达miRNA186能够明显抑制前列腺癌细胞的增殖能力和肿瘤瘤球的形成,其作用的机制是通过直接与YY1和CDK6基因信使RNA的3UTR区结合,干扰YY1和CDK6表达,抑制前列腺癌的发生与发展。通过以上研究结果,也为临床上前列腺癌的诊断和治疗提供了一个新的靶点。
其他文献
目的:研究短肠病人实施短肠康复治疗对改善病人营养状况以及促进肠功能代偿的效果.方法:选择本院2016年2月至2020年1月间收治的短肠病人52例作为研究样本,采用双盲法将其分为
期刊
长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一类超过200核苷酸单位的RNA分子,它们并不具有蛋白编码功能,而是在多种层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控基因的
期刊
目的:探究胰岛素治疗的肥胖2型糖尿病患者加用利拉鲁肽的临床疗效研究.方法:选取肥胖2型糖尿病患者72例,在我院于2018年9月至2019年9月进行治疗,按照接诊顺序奇偶性分为观察
目的:本文针对螺旋CT在急性胰腺炎诊断中的应用进行探讨.方法:选取我院2018年10月-2020年2月所接收的92例急性胰腺炎患者作为实验研究对象,对患者胰腺炎及相关病变区域进行螺
目的:探讨在呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎患儿的治疗中,采用α-干扰素的临床效果.方法:以我院接诊的RSV肺炎患儿为对象,经过筛取后确定50例作为样本,随机分为对照组与观察组,给予
目的:探讨痰热清注射液治疗急性支气管炎的临床效果.方法:随机选择2019年10月至2020年1月在我院接受治疗的100例急性支气管炎患者,将其分为两组进行对比研究.即研究组、对照
目的:分析单纯内固定与内固定结合椎体成形术治疗脊柱骨折的效果.方法:选择2016年7月-2019年8月我院接受的72例脊柱骨折患者为对象,按照治疗方式分组,分别是对照组和治疗组,
目的:本文将主要针对高血压脑出血患者应用不同的手术治疗方式的临床疗效进行探究.方法:选取2018年5月-2020年2月我院接收的38位高血压脑出血患者为研究对象,随患者及家属意