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目的本文选用ApoE基因敲除(apolipoproteinEgeneknockout,ApoE-/-)小鼠作为研究对象。旨在讨论菲牛蛭对ApoE-/-小鼠血脂水平以及动脉粥样硬化斑块内相关蛋白和基因的表达,以探讨菲牛蛭抗动脉粥样硬化的可能机制。方法本文选用15周龄雄性ApoE-/-小鼠高脂饲料喂养5周建立动脉粥样硬化的小鼠模型。后将ApoE-/-小鼠随机分为模型组Mol (n=8)、为菲牛蛭粉高剂量组HPH (200mg.kg-1.d-1, n=8)、菲牛蛭粉低剂量组HPL (75mg.kg-1.d-1,n=8)、辛伐他汀组Sim (3mg.kg-1.d-1,n=8)、菲牛蛭素高剂量组BDH(400U.kg-1.d-1,n=8)、菲牛蛭粉低剂量组BDL (200U.kg-1,d-1, n=8);C57BL/J6作为空白对照组Con (control group, n=8),给药时间为10周。10周后检测实验指标如下:1.测定各组小鼠的血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的水平;2.通过HE染色,观察各组小鼠主动脉根部粥样硬化斑块情况;3.通过Masson染色,观察各组小鼠主动脉根部粥样硬化斑块内胶原含量情况;4.运用免疫组化半定量法检测各组小鼠主动脉内CD34、VEGF、VEGFR-2、HIF-1 α的蛋白表达情况5、运用实时定量RT-PCR检测各组小鼠主动脉中的VEGF、HIF-1α和VEGFR-2mRNA表达情况。结果血脂水平结果显示:与模型组相比,辛伐他汀组、菲牛蛭粉大剂量组、菲牛蛭粉小剂量组、菲牛蛭素大剂量组、菲牛蛭素小剂量组均能降低小鼠中TC、TG、LDL-C的水平(P<0.05或者P<0.01)。而与模型组相比,菲牛蛭粉大剂量组、菲牛蛭粉小剂量组、辛伐他汀组能升高HDL-C水平(P<0. 05或者P<0. 01)而菲牛蛭素大剂量组、菲牛蛭素小剂量组能降低HDL-C水平(P<0.05) 。(1)HE染色结果显示管腔内的病理结构,模型组中出现血管壁增厚,出现大量坏死组织、泡沫细胞,形成斑块。与模型组相比,各个治疗组以上斑块情况均有改善。(2)Masson染色结果显示:各组斑块中胶原含量分别为21. 5±2. 44%(模型组)、51.7±2.47% (菲牛蛭素大剂量组)、45.9±4.12% (菲牛蛭素小剂量组)、37.7±3.33% (辛伐他汀组)、31.6±4.80% (菲牛蛭粉大剂量组)、26. 0±2. 10% (菲牛蛭粉小剂量组),与模型组比较各个治疗组均有统计学差异(P<0.01)(3) CD34免疫组化结果显示:与正常对照组相比较,模型组与各个治疗组中的CD34含量均高于对照组(P<0. 01);与模型组相比,各个治疗组中的CD34含量均明显减少(P<0. 05或者P<0. 01).菲牛蛭粉大剂量组与菲牛蛭粉小剂量组间有显著差异(P<0. 05)(4) VEGF免疫组化结果显示:与正常对照组相比较,模型组与各个治疗组中的VEGF含量均高于对照组(P<0. 01);与模型组相比,各个治疗组中的VEGF含量均明显减少(P<0. 05或者P<0. 01);菲牛蛭素大剂量组和菲牛蛭素小剂量组之间有显著差异(P<0. 05);菲牛蛭粉大剂量组、菲牛蛭粉小剂量组间有显著差异(P<0. 05)(5)VEGFR-2免疫组化结果显示:与正常对照组相比较,模型组与各个治疗组中的VEGF含量均高于对照组(P<0. 01);与模型组相比,各个治疗组中的VEGF含量均明显减少(P<0.01);(6)HIF-1 α免疫组化结果显示:与正常对照组相比较,模型组与各个治疗组中的HIF-1α含量均高于对照组(P<0. 01);与模型组相比,各个治疗组中的HIF-1α含量均明显减少(P<0. 01);菲牛蛭素大剂量组和菲牛蛭素小剂量组之间有显著差异(P<0. 01);菲牛蛭粉大剂量组与菲牛蛭粉小剂量组之间无明显差异(P>0. 05)(7)RT-PCR结果显示,VEGFmRNA表达比较:与正常对照组相比,模型组小鼠血管壁VEGFmRNA表达显著升高(P<0. 01);与模型组相比,各药物干预组血管壁VEGR mRNA表达均明显下降(P<0. 01)(8)RT-PCR结果显示,VEGFR-2mRNA表达比较:与正常对照组相比,模型组小鼠血管壁VEGFR-2mRNA表达显著升高(P<0. 01);与模型组相比,各药物组血管壁VEGFR-2mRNA表达均明显下降(P<0. 01)(9) HIF-1α mRNA表达比较:与正常对照组相比,模型组小鼠血管壁HIF-1 α mRNA表达显著升高(P<0. 01);与模型组相比,各药物组血管壁HIF-1α mRNA表达均明显下降(P<0. 01);其中菲牛蛭素大剂量组下降最为显著(P<0. 01);辛伐他汀组表达均低于菲牛蛭粉大剂量组和菲牛蛭粉小剂量组(P<0.01)结论1、菲牛蛭能够降低ApoE-/-小鼠的血脂水平。2、菲牛蛭能抑制动脉粥样硬化斑块形成,增加斑块内胶原,增加动脉粥样硬化斑块的稳定性,其中菲牛蛭素效果明显。3、菲牛蛭能抑制动脉粥样硬化斑块中的血管新生,抑制血管新生相关基因VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA、HIF-1αmRNA以及相应蛋白的表达。