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第一部分 钾离子通道在小鼠精子体外获能中的作用 以金霉素（chlortetracycline,CTC）荧光染色法评价小鼠精子的体外获能，并观察K+离子载体缬氨霉素（Val）对小鼠精子体外获能的影响，CTC荧光染色后涂片观察，以B型精子的发生率来评价精子获能，B型精子发生率越高，获能越完全。 钾离子载体缬氨霉素能促使体细胞钾离子外流，实验以终浓度为50nmol·L-1的缬氨霉素处理小鼠精子，其B型精子发生率（％）与对照组相比显著增加（n=10，p＜0.05），表明缬氨霉素能促进小鼠精子的体外获能，由于缬氨霉素能促使体细胞内钾离子外流，提示在精子体外获能过程中，钾离子外流是重要的一环。 进一步采用全细胞膜片箝技术记录小鼠粗线期精母细胞延迟整流钾电流(IDRK)，并分析其电流特性，同时观察缬氨霉素对IDRK的影响。结果显示：在小鼠粗线期精母细胞上能记录到一个被缓慢激活南京医科大学硕十学位论文的外向钾电流，其幅度随去极化电压的升高而增大，该电流的上升幅度具有明显的电压依赖性，但通道的开放没有明显的时间依赖性失活。本实验使用的电极内液含有10mmol.L一’的caZ+鳌合剂EGTA，可有效地防止胞内游离Ca2+浓度升高，因此该外向钾电流中基本不包含Ca2+激活的钾通道电流，而且该电流对4一AP不敏感，但TEACI可显著抑制该电流，因此可初步判断该电流为延迟整流钾电流（ID二）。 进一步观察到加入50nmol.L一’颧氨霉素后，小鼠生精细胞上延迟整流钾电流显著增大，I一V曲线上调。分析实验结果:颧氛霉素通过激活延迟整流钾通道，增加胞内钾离子的外流，从而使精子膜电位发生超极化，进而促发小鼠精子体外获能。第二部分氛戊菊醋对小鼠精子获能的影响及机制探讨 200川小鼠精子细胞悬液加入不同终浓度氰戊菊醋（Fen）染毒后，eo:孵箱37℃培育2，J、时，结果显示:以终浓度（林mol·L一，）为。、0.625、1 .25、2.5、5.0、10.0、20.0的Fen处理小鼠精子，其B型精子发生率（%）分别为55.05士0.43、52.02士1 .29、47.13士0.87、40.08士0.32、35.79士0.88、28.66土0.96、27.89士1 .56，半数有效剂量 （E DS。）为5尽mol·L一’。表明氰戊菊醋抑制小鼠精子体外获能，其作用呈剂量一反应关系（P<0.05，n一12），同时具有时间依赖性。 我们进一步探讨了Fen抑制小鼠精子体外获能机制，发现氰戊菊醋可轻微抑制小鼠粗线期精母细胞延迟整流钾电流，提示氰戊菊醋主要不是通过延迟整流钾离子通道途径影响精子体外获能。同时实验还观察到，氰戊菊醋能显著抑制精子细胞膜的脂质流动性。我们选择l，6一二苯已三烯（DPH）为荧光探针结合细胞染毒，测定小鼠精子细胞膜脂质的荧光偏振度（P值），来观察氰戊菊醋对精子细胞膜脂质流动性的影响。结果表明，以O、0.625、1 .25、2.5、5.0、10.0、20.0南京医科大学硕l学位论文。molL一’的Fen处理小鼠精子，从2.5 0 mol·L一’起，氰戊菊醋即显著增高小鼠精子细胞膜脂质DPH探针的荧光偏振度（P值）、降低膜脂质流动度LFu（P<0.05，n=15）:10抖mol·L一，一20林mol·L一，浓度的氰戊菊醋组，其P值与LFU到达平台期。提示氰戊菊醋可增高小鼠精子细胞膜脂质的荧光偏振度，降低细胞膜脂质流动性，并具有浓度依赖关系。经相关分析发现，氰戊菊醋抑制小鼠精子体外获能及降低精子细胞膜脂质流动性，这两者的作用剂量高度相关（:2=0 .968），提示氰戊菊醋可通过降低精子细胞膜的脂质流动性而抑制小鼠精子体外获能。