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目的: 探讨食管癌细胞中Gli-1,Shh,Ptch,Smo等与SHh信号通路异常激活是否相关,并进一步研究SHh通路关键因子Gli-1与食管癌放射抗拒性的关系。 方法: 1、将人食管癌亲本细胞株Eca109采用X射线反复照射,累计放射剂量至60Gy,形成放射抗拒株Eca109R; 2、采用平板克隆形成法检测Eca109及Eca109R对射线的敏感性; 3、采用免疫荧光化学法检测Gli-1在Eca109及Eca109R细胞核内的表达; 4、采用RT-qPCR法检测Gli-1,Shh,Ptch,Smo四种RNA在Eca109及Eca109R的表达情况; 5、采用Western Blot法检测Gli-1,Shh,Ptch,Smo四种蛋白在Eca109及Eca109R的表达情况; 6、采用Gli-1沉默质粒转染Eca109R; 7、采用Western Blot法检测转染后Eca109R中Gli-1蛋白的表达情况; 8、采用平板克隆形成法检测转染后的Eca109R及Eca109R对射线的敏感性。 结果: 1、平板克隆形成实验显示,在照射剂量相同的情况下,Eca109和Eca109R细胞的存活分数(SF2)分别为0.499±0.042和0.937±0.013,说明Eca109R细胞有明显的放射抗拒性,即放射抗拒株诱导成功; 2、免疫荧光结果显示Eca109R细胞中Gli-1表达明显高于Eca109细胞(p<0.05); 3、RT-qPCR结果显示Eca109R细胞中Gli-1与Shh表达明显高于Eca109细胞(p<0.05); 4、Western Blot结果显示Gli-1,Shh,Ptch,Smo四种蛋白在Eca109R细胞中表达明显高于Eca109细胞(p<0.05); 5、Western Blot结果显示Eca109R细胞转染Gli-1沉默质粒后,与未转染的Eca109R细胞相比,Gli-1表达明显低于未转染的Eca109R细胞(p<0.05); 6、克隆形成实验显示转染后的Eca109R细胞相对未转染细胞对射线敏感性增加,放射抗拒性降低。 结论: Eca109R细胞中SHh信号通路异常激活;SHh信号通路关键因子Gli-1高表达与Eca109放射抗拒有关。