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随着人们对化学农药环境污染危害认识的提高,农田杂草治理逐渐向综合防治的方向发展。在杂草综合治理中生物除草剂和化学除草剂常常被一同使用。研究化学除草剂对生物除草剂的影响,解决两者的配合使用问题是进行杂草综合治理的前提。核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)是正在被开发的生物除草剂。它与化学除草剂之间的相互作用效果有待于测定。本文对核盘菌(S. sclerotiorum)生长受五种化学除草剂影响的特征,该菌EPSP合酶的酶学特征及其相关基因arom的克隆和表达进行了研究,致力于提供可用于构建抗草甘膦生物除草剂的目的基因,为解决生物除草剂与化学除草剂之间的相容问题进行杂草综合治理奠定基础。在实验室条件下测定了不同浓度农达、莠去津、灭草松、百草枯和2.4-D丁酯对核盘菌(S. sclerotiorum)生长的影响。结果显示,这五种化学除草剂对核盘菌(S. sclerotiorum)菌核萌发无促进或抑制作用。该菌菌丝生长速度不受推荐使用浓度的莠去津、农达和2.4-D丁酯显著抑制(P>0.05),而被推荐使用浓度的百草枯和灭草松极显著抑制(P<0.01)。实验中测试的各种浓度的农达不影响核盘菌(S. sclerotiorum)菌核生长,而莠去津、灭草松、百草枯和2.4-D丁酯不同程度地抑制了菌核生长。用离子交换层析和凝胶过滤层析部分纯化核盘菌(S. sclerotiorum)AROM蛋白,测定了各种因素对该菌EPSP合酶活性的影响。结果表明,该酶的最适反应pH值为7.2,最适反应温度为30℃,酸碱稳定性在pH6.7-7.2,温度稳定性在30-40℃,受K+和EDTA激活,受Fe 2+、Mn 2+、Cu2+等离子、脲和高浓度底物抑制,遵循顺序反应机制,相对于底物PEP受草甘膦竞争性抑制,与核盘菌(S. sclerotiorum)的草甘膦抗性相关。使用PCR方法扩增了核盘菌(S. sclerotiorum)arom基因组DNA序列。序列分析结果说明,该基因和粗糙脉胞霉(Neurospora crassa)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)arom基因同源。推测的蛋白序列与已知AROM蛋白同源,含有AROM蛋白特有的保守结构域、模式和保守氨基酸,与构巢曲霉(A. nidulans)、烟曲霉(A. fumigantus)AROM蛋白的亲缘关系较近。蛋白结构建模结果显示了该菌AROM蛋白各结构域的三级结构。采用载体pGEX-4t-2、pET28b与不同的大肠杆菌(Escherichia coli)菌株构建了分别含有重组质粒pGEX-DE、pGEX-E、pET-DE和pET-E的表达