女贞子化学成分的提取分离鉴定及活性研究

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本实验采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS柱色谱以及重结晶等分离纯化的方法,根据理化性质和光谱鉴定化合物的结构,对女贞子中的主要成分进行分离与鉴定。在此基础上,采用高浓度胰岛素诱导培养HepG2细胞,建立胰岛素抵抗细胞模型,探讨女贞子中分离得到的化合物对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响。采用MTT法检测从女贞子中分离得到的三萜类成分的抗肿瘤活性。结果显示从女贞子中分离得到并鉴定了8个化合物,结构分别为:齐墩果酸(oleanolic acid),乙酰齐墩果酸(acetyl oleanolic acid),19α-羟基-3-乙酰乌索酸(19a-hydroxy-3-acetyl-ursolic acid),槲皮素(quercetin),芹菜素-6"-O-乙酰-7-O-β-D-葡萄糖苷(apigenin-6"-O-acetyl-7-O-β-D-glucoside),对羟基苯乙醇-O-β-D-葡萄糖苷(p-hydroxyphenethyl-O-β-D-glycoside),女贞苷(nuezhenide), GI3。齐墩果酸、19α-羟基-3-乙酰乌索酸、芹菜素-6"-O-乙酰-7-O-β-D-葡萄糖昔、对羟基苯乙醇-O-β-D-葡萄糖苷、GI3在不含生理浓度胰岛素条件下可使胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加11.62%、17.21%、11.85%、12.08%、10.54%;加入生理浓度胰岛素后,上述化合物可使细胞葡萄糖消耗量增加12.95%、13.83%、17.41%、14.26%、10.84%。槲皮素、女贞苷在不含生理胰岛素条件下不增加细胞的葡萄糖消耗量;加入生理浓度胰岛素后,可使细胞葡萄糖消耗量增加15.70%、17.04%,其中槲皮素促进细胞增殖。齐墩果酸、芹菜素-6"-O-乙酰-7-O-β-D-葡萄糖苷等增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量呈非胰岛素依赖性,其中芹菜素-6"-O-乙酰-7-O-β-D-葡萄糖苷与生理浓度胰岛素有协同增强作用;女贞苷、槲皮素增加细胞葡萄糖消耗量呈胰岛素依赖性,槲皮素能显著促进细胞增殖。3个三萜类化合物作用72h,随着化合物浓度的增加,其细胞生长抑制率均显著增加。细胞周期分析显示,随着浓度的增加及作用时间的延长,19α-羟基-3-乙酰乌索酸使Hela、A549细胞G2/M期细胞比例较正常对照组显著增加。女贞子中三萜类成分齐墩果酸、乙酰齐墩果酸、19α-羟基-3-乙酰乌索酸具有一定的体外抗肿瘤作用,初步确定它们为女贞子抗肿瘤的活性成分。
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