纤维素酶（Cellulase）是降解纤维素生成葡萄糖的一类多组分酶系,包括外切葡聚糖酶（C1酶）、内切葡聚糖酶（CX酶）和β-葡萄糖苷酶,在食品、酿造行业、农副产品深加工、饲料、医药、环境保护和化工等领域以及再生能源利用方面具有很广阔的应用前景。本试验以鹅源草酸青霉（Penicillium oxalicum Currie & Thom）F67为试验对象,采用液体发酵培养法,通过测定C1酶、CX酶、β-葡萄糖苷酶和FPA四种酶活,研究不同培养基组成（碳源、氮源）及发酵条件（通气量、接种量、时间、温度及培养基起始pH）对菌株产纤维素酶的影响,并根据所得试验结果进一步设计正交试验,最终确定最佳产酶培养基组成及发酵条件;同时,采用RT-PCR、兼并PCR及TAIL-PCR等分子生物学技术克隆了其外切葡聚糖酶CBHⅠ基因,构建了真核表达载体,并运用生物信息学手段进行分析,为研究其分子特性及构建高效纤维素分解菌开辟新的途径。本试验主要得到如下研究结果:1.试验对鹅源草酸青霉F67产纤维素酶液体发酵特性研究发现:羧甲基纤维素钠（适宜添加范围为0.9g～1.2g/100mL）可以强烈诱导草酸青霉产纤维素酶（P<0.01）;以尿素为氮源时（适宜添加范围为0.6g～1.2g/100mL）各种酶活均维持在较高水平（P<0.01）。CX酶活、C1酶活和β-葡聚糖苷酶活最高时的最适接种量分别为3%、7%和7%;发酵温度分别为30℃、28℃和30℃;培养基起始pH均为5.5;发酵时间分别为96h、72h和96h。2.根据NCBI上已登陆的青霉属纤维素酶CBHⅠ基因的氨基酸序列设计兼并引物,通过RT-PCR方法扩增了鹅源草酸青霉F67 CBHⅠ基因片段（登录号为EU574736）,经Blast分析,该序列与微紫青霉CBHⅠ基因的同源性最高,达84%。在已克隆的CBHⅠ基因片段的基础上,试验设计了随机兼并引物和特异性引物,以cDNA为模板,采用改良后的热不对称交错PCR（TAIL-PCR）技术分别成功克隆了该基因的3’端和5’端侧翼序列。3.根据克隆的CBHⅠ基因3’端和5’端侧翼序列分别设计特异性引物,同时引入酶切位点EcoRⅠ/NotⅠ,通过RT-PCR方法扩增了CBHⅠ基因序列1638bp（登录号为EU727171）,编码545个氨基酸和一个终止密码子TAA。提取阳性克隆质粒进行EcoRⅠ/NotⅠ双酶切,与同样经双酶切的分泌型表达载体pPIC9K进行连接转化,挑取阳性转化子,经PCR和酶切鉴定,鹅源草酸青霉F67 CBHⅠ基因真核表达载体pPIC9K-CBHⅠ构建成功。4.对鹅源草酸青霉F67 CBHⅠ基因氨基酸序列的生物信息学分析表明:其分子量为56.8kD,等电点为4.9;前26个氨基酸可能为信号肽序列,并且具有较强的疏水性;共具有43个磷酸化修饰位点,其中包括16个丝氨酸位点,18个苏氨酸位点和9个酪氨酸位点;结构功能预测表明该蛋白由三个结构功能域组成,分别是糖基化水解酶第7家族的催化功能域（aa30-461）、衔接区（aa462-512）和真菌性纤维素结合域（aa513-545）;亚细胞定位分析发现草酸青霉F67 CBHⅠ蛋白有55.6 %可能存在于细胞外;经同源性分析,该序列与微紫青霉（Penicillium janthinellum,登录号为X59054.1）同源性最高,达76%。