294个稻瘟病菌转录因子基因的敲除和功能分析

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稻瘟病(rice blast)是严重危害水稻的病害之一,造成了水稻产量的严重损失。稻瘟病(Magnaporthe oryzae)是一种丝状子囊真菌,除水稻外,稻瘟病菌还可以侵染如小麦、大麦,玉米等多种禾本科植物。稻瘟病菌70-15菌株全基因组序列测序已于2002年10月完成,为深入研究稻瘟病菌的致病机理和发育机制提供了坚实的基础。稻瘟病菌的基因表达受多级调控,而转录水平的调控是基因表达过程的第一步,也是最重要的一步。转录因子是基因表达调控的关键因子。通过基因敲除方法,将转录因子基因敲除,观察缺失该转录因子后,稻瘟病菌的表型及致病性变化,是一种研究基因功能的有效手段。一个转录因子可以调控多个靶基因,一个基因也同时受到多个转录因子的调控,从而形成复杂的基因表达网络调控机制,因而仅对少数几个转录因子的研究已不能满足需要。本文通过敲除大量转录因子基因,为研究稻瘟病菌的基因功能以信号传导通路,代谢调节网络提供技术支持。对bHLH、bZIP、HMG、Homeodomain及锌指基序等5个疑似转录因子家族的294个基因进行了基因敲除研究:成功构建了277个基因的敲除载体;通过ATMT转化方法对稻瘟病菌进行转录因子基因敲除实验,获得171个转录因子基因的敲除突变体。在171个转录因子基因敲除突变体中,测定了167个基因的突变子表型,发现49个基因的敲除影响到稻瘟菌的生长、产孢、致病性:其中9个基因影响生长速度,24个基因影响产孢,16个基因影响致病性,说明这些转录因子在稻瘟病菌生长发育及致病性过程中具有非常重要的功能。继续深入研究这些转录因子及其所调控的基因和调控过程,对于更深入的了解稻瘟病菌的基因调控网络,并对于理解其致病机制具有重要意义。
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