载IL-1ra原位注射型温敏水凝胶抗糖尿病大鼠牙周炎的实验研究

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目的:牙周炎是一种慢性炎症性疾病,其中免疫炎症反应起着关键作用。高血糖可促使炎症细胞分泌各种炎症因子,引起牙周组织的破坏,导致牙周炎的持续发展和牙周组织炎症的迁延不愈。白细胞介素1β(IL-1β)是一种重要的前期炎症因子,参与牙周炎的病理生理过程。白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1ra)是IL-1的天然抑制剂,也可以降低其他细胞因子的水平,包括肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6),IL-1ra和IL-1β之间的平衡是影响慢性牙周炎(CP)的主要因素之一。方法:1、采用壳聚糖(CS)、β-甘油磷酸钠(β-GP)、明胶(Gel)三种原材料制备载IL-1ra温敏水凝胶,试管倒置法记录凝胶时间,扫描电子显微镜(SEM)观察水凝胶形态,运用傅里叶变换红外光谱分析(FTIR)、X射线衍射分析(XRD)技术对水凝胶进行表征,IL-1ra Elisa试剂盒检测水凝胶的体外释放特性。2、CCK-8试剂盒检测IL-1ra温敏水凝胶对RAW264.7细胞系的细胞毒性,建立高糖RAW264.7细胞模型,定量实时聚合酶链反应(q RT-PCR)检测水凝胶对该细胞模型的体外抗炎作用。3、建立糖尿病大鼠牙周炎模型,监测水凝胶治疗后大鼠的体重变化及血糖水平,并对大鼠牙周组织进行切片、H&E染色和免疫组织化学染色(IHC),以评价水凝胶的体内毒性及抗炎作用。通过显微计算机断层扫描(Micro-CT)观察大鼠牙槽骨的骨吸收水平。结果:1、本实验成功制备了原位注射型载IL-1ra温敏水凝胶,37℃下、5min后可成胶,该水凝胶疏松多孔,孔径在5-70μm之间,第21天时IL-1ra累积释放量可达83.23%。2、载IL-1ra温敏水凝胶作用下RAW264.7细胞的细胞存活率与各对照组无显著性差异,IL-1β、IL-6、TNF-α的表达与高糖培养条件下脂多糖(LPS)刺激组相比显著下降。3、大鼠血清肝肾指标的分析显示各组大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肌酐(Cr)均无显著性差异,载IL-1ra温敏水凝胶治疗组与对照组呈现出相似的体重变化曲线。IL-1ra治疗组大鼠血糖(9.80±0.80mmol/L)及糖化血红蛋白(5.70±0.69%)水平与糖尿病牙周炎组相比明显下降。组织学评价和Micro-CT显示,经IL-1ra水凝胶治疗后,与糖尿病牙周炎组相比上皮下炎症细胞浸润有所减少,IL-1β(11.91±6.10%)和IL-6(11.81±2.94%)阳性细胞占比减少,免疫反应积分经从6降至1.2,牙槽骨水平有所上升。结论:载IL-1ra原位注射型温敏水凝胶形貌良好,在体内外均无明显毒性,可实现药物缓释,该水凝胶可有效抑制伴糖尿病大鼠的牙周组织炎症,在缓解糖尿病大鼠高血糖水平上也发挥显著作用。
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