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防己类植物的干燥根中含有防己诺林碱,在中医中防己常作为止痛,抗风湿及抗高血压药物等使用,近年来,它的抗癌作用也受到人们的关注,有关文献报道,防己诺林碱能够诱导某些肿瘤细胞发生细胞循环阻滞,而且,也可以诱导某些肿瘤细胞发生细胞凋亡,但对乳腺癌细胞的报道较少。本研究从防己诺林碱能够在体外诱导乳腺癌细胞发生凋亡,并且导致细胞循环阻滞的角度,阐明防己诺林碱的抗癌分子机制。 本文通过防己诺林碱在体外作用于乳腺癌细胞,并对其机制进行研究,在防己诺林碱诱导细胞凋亡的实验中,我们发现乳腺癌细胞对防己诺林碱的作用较为敏感,测得24小时和48小时的IC50值份别为25.32±1.2μM和14.48.±1.5μM,实验结果表明,防己诺林碱能够抑制乳腺癌细胞的生长且具有时间、剂量依赖的特性。荧光染色(HOECHST33342染色)后证明防己诺林碱作用细胞24小时小时后,出现明显的细胞核凝聚和核碎裂以及凋亡小体,电泳和流式进一步证明防己诺林碱诱导的细胞毒作用是平衡于凋亡与坏死之间。防己诺林碱诱导半胱氨酸蛋白酶-3,-8,和-9,以及聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的激活,而且,也促进线粒体内细胞色素C的释放,WesternBlot显示防己诺林碱升高Bax的表达水平,降低Bcl-2的表达水平,另外,防己诺林碱的增殖抑制作用可能通过降低磷酸化Akt表达来实现。 我们也发现防己诺林碱诱导乳腺癌细胞G1期细胞阻滞,通过分析细胞循环相关蛋白的表达,可见,防己诺林碱降低cyclin D1,cyclin D3,和cyclin E,的表达,而升高p21/WAF1和p27/KIP1的表达,并且,防己诺林碱也抑制CDK2,CDK4,以及CDK6的激活。 综上所述,我们的研究证明防己诺林碱通过多种途径诱导乳腺癌细胞循环阻滞以及细胞的凋亡的调节。(1)磷脂酰肌醇-3激酶/AKT通路与防己诺林碱诱导的细胞毒作用有关;(2)防己诺林碱诱导的G1期阻滞与细胞cyclinD1,cyclin D3,以及cyclin E蛋白表达水平下降有关;(3)防己诺林碱诱导的乳腺癌细胞凋亡通过激活半胱氨酸蛋白酶-3,从而激活其底物聚腺苷二磷酸核糖聚合酶的断裂活化有关;经过线粒体细胞凋亡途径;改变了促进和拮抗凋亡蛋白的表达比率;(4)防已诺林碱诱导的G1期细胞阻滞与抑制细胞循环调节相关蛋白CDK2,CDK4,以及CDK6的活化有关;(5)防己诺林碱诱导的G1期细胞阻滞与细胞循环调节相关蛋白p21/WAF1以及p27/KIP1有关;因此防己诺林碱可能作为一种潜在的新药,用于治疗恶性肿瘤。