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目的:研究搭载阿霉素(DOX)介孔纳米二氧化硅(MSNs)对人宫颈癌细胞的增殖、凋亡及自噬的影响,并初步探讨其可能的分子生物学机制。材料和方法:选取不同组织学来源的HeLa细胞(腺癌)、SiHa细胞(鳞癌)作为研究对象,采用MTT比色法分别检测浓度梯度为0.5、0.75、1、1.25、1.5μg/m L以及2.5、5、7.5、10μg/m L的DOX溶液对HeLa、Si Ha细胞的毒性,确定DOX的搭载浓度。按照DOX/MSNs=1:1,1:2,1:4,1:8的浓度比例分别搭载DOX,采用MTT比色法检测细胞的增殖毒性;流式细胞术分析细胞凋亡;Hoechst染色、MDC染色观察其对细胞凋亡及自噬的影响;蛋白免疫印迹(WB)检测细胞凋亡蛋白Akt、P-Akt、Bax和Bcl-2及自噬相关蛋白P62、ATG5及LC3B的表达水平。结果:(1)DOX的搭载浓度:根据MTT结果选择24 h为后续实验中的检测时间,1μg/m L、5μg/mL分别为HeLa、SiHa细胞DOX的搭载浓度。(2)搭载DOX的MSNs对细胞增殖毒性的影响:随着MSNs浓度比例的增加,HeLa、SiHa细胞的存活率均降低,呈MSNs浓度依赖性,且其对HeLa细胞的增殖毒性较SiHa细胞趋势更明显。镜下观察实验组HeLa、SiHa细胞较空白组均出现正常细胞数目减少等改变。(3)搭载DOX的MSNs对细胞凋亡、自噬的影响:Hoechst染色示实验组HeLa、SiHa细胞出现细胞核碎裂、细胞质浓缩等凋亡特征,并可观察到凋亡小体。流式细胞术分析示实验组HeLa、Si Ha细胞凋亡比例增高,呈MSNs浓度依赖性;SiHa细胞主要表现为早期凋亡,而HeLa细胞主要表现为晚期凋亡或坏死。MDC染色示实验组HeLa、SiHa细胞中出现自噬小体。(4)搭载DOX的MSNs对细胞凋亡、自噬相关蛋白水平的影响:Western blot结果示实验组HeLa、Si Ha细胞的p-Akt/Akt相对表达量降低,Caspase3表达量升高,Bax/Bcl-2相对表达量升高。HeLa细胞各实验组P62表达量降低,LC3B表达量升高,ATG-5表达量和空白组相比除单独阿霉素组外其余各实验组升高;SiHa细胞各实验组P62的表达量降低,LC3B表达量与空白组相比除单独阿霉素组外其余实验组升高,1:8组ATG-5表达量升高。结论:(1)在相同DOX药物浓度下,搭载DOX的MSNs可以抑制HeLa、SiHa细胞的增殖,且MSNs的浓度比例越高抑制作用越强。(2)搭载DOX的MSNs可以诱导HeLa、SiHa细胞发生凋亡和自噬。区别在于SiHa细胞主要为早期凋亡,HeLa细胞主要为晚期凋亡及坏死,表明此种搭载DOX的MSNs可能更适用于人宫颈鳞癌(SiHa)细胞。(3)搭载DOX的MSNs诱导凋亡的机制可能是通过抑制PI3K/Akt信号转导通路,改变Caspase3和Bax/Bcl-2的表达;诱导自噬的机制可能是改变自噬相关蛋白LC3B、ATG5及P62表达。