自血穴位注射调控特应性皮炎小鼠Th1/Th2免疫平衡的实验研究

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目的评价自血穴位注射疗法(Acupoint Autohemotherapy,A-AHT)对 1-氯-2,4-二硝基苯(1-chloro-2,4-dinitrobenzene,DNCB)诱导的特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)小鼠T辅助细胞(T helper,Th)1/Th2免疫平衡的调节作用。方法将30只BALB/c小鼠按随机数字表分为5组,包括正常对照组(Normal control,NC)、AD模型组(AD)、自血穴位注射组(A-AHT)、自血非穴注射组(Sham acupoint Autohemotherapy,sA-AHT)、生理盐水穴位注射组(Acupoint injection of normal saline,A-NS),每组 6 只小鼠。使用 DNCB 致敏小鼠建立实验性AD小鼠模型。实验第8天起,除NC组和AD组外,其余各组小鼠隔日干预一次,共27天。对于A-AHT组,将自体全血(autologous whole blood,AWB)注入小鼠双侧足三里(ST 36)、曲池(LI 11)中,每穴0.05 mL;对于sA-AHT组,将AWB注入小鼠双侧ST 36和LI 11对应的非穴(ST 36和LI 11外侧5 mm)中。对于A-NS组,在小鼠双侧ST 36和LI 11注射生理盐水0.05mL。每周使用特应性皮炎严重程度评分(Severity Scoring of Atopic Dermatitis,SCORAD)确定小鼠背部皮肤的皮炎严重程度。通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中总免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)-E、干扰素(Interferon,IFN)-γ 和白细胞介素(Interleukin,IL)-4细胞因子水平。通过流式细胞术(Flow cytometry,FCM)分析小鼠脾细胞中的Th1/Th2的比例,并使用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)进一步评估局部皮损组织中T-bet转录因子(T-box expressed in T cell,T-bet)和GATA-3 转录因子(GATA-binding protein 3,GATA3)的表达。结果与AD组相比,A-AHT和sA-AHT均降低AD小鼠的SCORAD和血清IgE水平(P<0.05或P<0.01);A-AHT、sA-AHT和A-NS下调小鼠血清IL-4水平,上调 IFN-γ/IL-4 比值(P<0.05 或 P<0.01);A-AHT 特异性调节 Th1/Th2 平衡,增加相关转录因子T-bet表达并上调T-bet/GATA3比值(P<0.05)。结论A-AHT通过调节Th1/Th2免疫反应对AD模型小鼠具有显着疗效。
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