流感病毒是一种重要的人兽共患病病原,自1918年H1N1亚型流感大流行以来,已经有四次人流感大流行,对人类公共卫生安全构成严重的威胁。根据病毒表面糖蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)抗原性的差异,已有研究表明流感病毒可以分为18种HA亚型和11种NA亚型。防控流感病毒感染与流行可利用抗流感病毒药物。目前广泛使用的抗流感病毒药物主要是金刚烷类及扎那米韦类抗流感药物,分别针对流感病毒基质蛋白(M2)和神经氨酸酶蛋白(NA),但是在临床应用过程中已经出现耐药毒株。流感病毒作为一个宿主内寄生的病原体,仅编码十几种蛋白,如此小的编码能力决定了其在整个生命周期中需依赖于病毒蛋白和宿主蛋白之间的相互作用。因此通过寻找病毒复制周期中所依赖的关键宿主因子,可以加深我们对流感病毒复制周期的认识,为抗流感病毒药物研发提供潜在的新靶点。流感病毒的NP蛋白在流感病毒复制过程中发挥重要作用,并且NP蛋白在流感病毒不同亚型之间高度保守,因此NP蛋白被作为良好的药物靶标广泛研究。本研究中,我们利用酵母双杂交系统筛选了DFFA与NP蛋白相互作用,并且探索其影响流感病毒复制的机制。研究发现,DFFA与流感病毒的NP蛋白在酵母系统和哺乳动物细胞内均存在相互作用,并且其表达量的变化可抑制流感病毒在A549细胞上的复制。此外免疫共沉淀实验发现,流感病毒的PB1-F2蛋白与DFFA和DFFB蛋白之间均存在互作,但是三者之间不存在竞争结合。流感病毒的NP蛋白和PB1-F2蛋白参与细胞凋亡的过程,因此我们利用流式细胞术检测细胞凋亡,发现过表达DFFA,流感病毒感染后细胞凋亡被抑制,而利用siRNA干扰DFFA促进了细胞凋亡。结果表明细胞凋亡不是DFFA蛋白调节流感病毒复制的唯一条件。免疫共沉淀实验发现DFFA的剪切变异体2(DFF35)在转染HEK293T细胞后存在一种修饰,当与NP蛋白共同转染后这种修饰被减弱,因此DFFA对流感病毒的调控可能与其修饰有关。此外,本研究在前期实验室筛选TRIM家族蛋白中,获得了一个TRIM家族的蛋白,即TRIM6,通过免疫共沉淀实验发现,TRIM6蛋白与流感病毒的NP蛋白及PB1蛋白之间存在相互作用。利用siRNA干扰技术下调TRIM6的表达,可促进流感病毒复制达12倍,而瞬时过表达TRIM6可导致病毒滴度下调2.6倍,因此TRIM6负调控流感病毒在HEK293T细胞上的复制。探索TRIM6调控流感病毒复制机制研究发现,TRIM6作为TRIM家族成员对NP及PB1蛋白表达没有影响,NP蛋白表达会抑制TRIM6的表达,TRIM6抑制NP蛋白的苏素化水平。本研究中我们筛选了部分与流感病毒互作的宿主因子,并对其互作进行验证,而后对DFFA及TRIM6影响流感病毒复制的机制进行初步探索,相关研究可以拓宽我们对于宿主因子调控流感病毒复制网络的认知。