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目的:本研究的总体目的是对被检血血清游离循环DNA(Circulating Cell-free DNA,cfDNA)进行检测,探究其含量及完整性指数(长片段DNA含量与短片的DNA含量之比)在胃癌的诊断及治疗中的应用价值。测定肿瘤标记物CA199,研究单独检测cfDNA含量、完整性以及与肿瘤标记物联合检测对胃癌的诊断价值的高低,找到具有较高敏感性和特异性的指标。方法:本实验采用病例对照研究方法,选取2018年6月至2018年11月期间北华大学附属医院首次确诊为胃癌的患者30例(其中行胃癌切除术患者11例);选取同期胃良性疾病患者30例;对照组选择收集同期体检中心健康体检者30例;病例均经过胃镜及病理学诊断。收集所有研究对象血清标本(胃癌手术患者术前及术后第7天均采血),-80℃冷冻保存备用。首先提取所有研究对象血清cfDNA,-80℃冷冻保存备用。对提取的血清cfDNA进行琼脂糖凝胶电泳观察电泳图像。提取健康人血液基因组DNA,经紫外分光光度计定量,稀释成1-10000 ng/ml等5个浓度梯度为标准品。将所有研究对象cfDNA与标准品DNA分别以ALU-115片段及ALU-247片段为引物开始PCR扩增,依据荧光定量结果得出具体含量。以标准品在PCR扩增过程中达到荧光发光阈值(Ct值)为横坐标,以10为底求出浓度的对数(lg浓度)为纵坐标,建立血清cfDNA浓度测定标准曲线,得出不同研究对象ALU-115及ALU-247片段DNA浓度及完整性指数。比较胃癌组、胃良性疾病组及健康对照组cfDNA含量及完整性,结合胃癌患者的临床病理资料,探讨血清游离循环DNA含量及完整性在三组研究对象中的变化规律以及其对胃癌诊断的价值。通过对比手术前后cfDNA含量及完整性变化,探讨其对胃癌治疗的价值。最后,分别绘制ROC曲线,用于单个指标和联合检测结果的敏感性和特异性分析。结果:1.绘制人全血基因组ALU-115及ALU-247标准浓度曲线。2.得出ALU-115、ALU-247 DNA片段浓度及完整性指数。胃癌组:Alu-115片段含量中位数(四分位数间距)为500.151ng/ml(IQR422.797-916.144)ng/ml;Alu-247片段含量中位数(四分位数间距)为106.089 ng/ml(IQR63.604-188.175)ng/ml。胃良性疾病组:Alu-115片段含量中位数(四分位数间距)为164.926 ng/ml(IQR120.304-291.394)ng/ml;Alu-247片段含量中位数(四分位数间距)为43.878 ng/ml(IQR21.228-77.192)ng/ml。健康人群组:Alu-115片段含量中位数(四分位数间距)为116.357ng/ml(IQR53.440-252.851)ng/ml;Alu-247片段含量中位数(四分位数间距)为26.608 ng/ml(IQR10.850-67.093)ng/ml。胃癌组Alu-115片段含量中位数与胃良性疾病组及健康组均有统计学差异(Z=-5.13,P=0.000;Z=-6.15,P=0.000),胃良性疾病组与健康组Alu-115片段含量中位数无统计学差异(Z=-1.818,P=0.069)。胃癌组Alu-247片段含量中位数与胃良性疾病和健康组均有统计学差异(Z=-3.622,P=0.000;Z=-5.382,P=0.000),胃良性疾病组与健康组Alu-247片段含量中位数无统计学差异(Z=-1.892,P=0.058)。胃癌组完整性指数中位值为0.166(IQR0.137-0.303),胃良性疾病整性指数中位值为0.260(IQR0.144-0.388,健康人群组整性指数中位值为0.253(IQR0.169-0.369)。完整性指数在胃癌组、胃良性疾病组及健康人群组0.253(IQR0.169-0.369)之间均未见统计学差异(Z值分别为-1.575、-1.626、-1.33,P均>0.05)。3.胃癌组血清cfDNA含量与完整性与临床病理关系。血清cfDNAAlu-115及Alu-247片段含量与胃癌患者TNM分期有统计学意义(KW=11.709,P=0.008;KW=10.085,P=0.018),完整性指数与TNM分期无统计学差异。胃癌患者血清当中的cfDNA浓度以及完整性与患者的临床病理特征如性别、年龄、吸烟史无统计学意义;与是否存在HP感染、组织病理学分型、分化的程度、淋巴结转移及远处转移无明显差异。4.血清cfDNA含量与完整性对胃癌的治疗价值。Alu-115片段含量中位值术前组为496.569 ng/ml(IQR427.685-920.975)ng/ml,术后组为215.465 ng/ml(IQR162.017-843.187)ng/ml,手术治疗前后对比有统计学差异(Z=-2.003,P=0.045)。Alu-247片段含量中位值术前组为133.240 ng/ml(IQR54.002-244.823)ng/ml,术后组为51.698 ng/ml(IQR32.810-134.073)ng/ml,手术前后无统计学意义(Z=-1.609,P=0.108)。完整性指数中位值术前组为0.201(IQR0.145-0.299),术后组为0.189(IQR0.149-0.411),手术前后Alu-247片段含量及完整性指数虽无统计学意义(Z=-0.296,P=0.767),但手术后较术前呈减低趋势。5.ALU-115、完整性及肿瘤标记物CA199联合检测在胃癌诊断的敏感性及特异性比较。ALU-115、完整性及肿瘤标记物CA199三者联合检测其ROC曲线下面积可达到0.976,三者联合的敏感性为90%,特异性为96.3%。联合检测与单一检测相比,联合检测对胃癌更具有诊断价值。结论:1.cfDNA含量在胃癌患者血清中表达显著增加,胃癌术后明显下降,表明cfDNA含量有望成为胃癌诊断的肿瘤标记物,对胃癌疗效评估具有临床应用价值。2.cfDNA含量、完整性及肿瘤标记物联合检测对胃癌诊断的敏感性高于单一检测,cfDNA含量、完整性及肿瘤标记物联合检测对胃癌诊断的特异性高于单一检测,联合检测有利于提高胃癌的诊断率。