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灵杆菌脂多糖(Bacterium Prodigiosum Lipopolysaccharides, BP-LPS),是一种从灵杆菌(亦称粘质沙雷氏菌,Serratia marcescens)中提取的中性脂多糖,存在于灵杆菌细胞壁,其真空冷冻干燥制品为白色粉末,溶于水,不溶于有机溶剂。灵杆菌脂多糖的生物活性与细菌脂多糖的一般生物活性相同,但其无明显的内毒素作用。众多研究表明,灵杆菌脂多糖具有抗肿瘤、增强免疫力、抑感染和升高白细胞作用,目前已广泛应用于医学上的白细胞减少症、急慢性盆腔炎、肿瘤及乙型肝炎等疾病的辅助治疗,有实际的医药价值。本文对灵杆菌脂多糖进行了分离和活性研究,主要研究结果如下:(1)通过单因素试验及响应面分析试验对影响菌株Serratia marcescensNS-17发酵的主要因素进行了研究,确定了优化的培养基组成和发酵条件:麦芽糖8g/L,蛋白胨16g/L, NaCl1g/L, KCl2g/L;培养温度30℃,pH7.0,接种量4%,250mL摇瓶装液量50mL,摇床转速200rpm,培养32h,菌体干重达到4.662g/L,比初始培养条件的菌体干重提高了1.73倍。(2)研究了传统提取方法与微波辅助PW提取法对灵杆菌脂多糖提取效果的影响,得出微波辅助PW提取法可以有效的提高灵杆菌脂多糖的提取率。通过微波辅助PW法提取灵杆菌脂多糖的单因素实验,分别确定了各因素的适宜水平,并采用L9(34)正交试验,优化微波辅助提取BP-LPS的工艺参数。结果表明,微波辅助PW法提取灵杆菌脂多糖优化工艺条件为:提取固液比1:30,微波处理3min,功率250W,浸提60min,灵杆菌脂多糖提取量高达13.413mg/g,相比传统提取方法提高了1.99倍。(3)研究了几种树脂的脱蛋白效果,得到D301阴离子树脂较佳。并在此基础上,考察了影响D301阴离子树脂静态吸附蛋白的主要因素。结果表明:D301阴离子树脂最佳的脱蛋白条件为静态处理时间2h,粗脂多糖浓度2mg/ml,固液比1:5。D301阴离子树脂脱蛋白法与常用的三氯乙酸法、盐酸法、Sevage法进行比较实验,结果表明D301阴离子树脂法脱蛋白率效果好,脂多糖损失率低,是较为理想的脱蛋白方法。(4)经Sephadex G-100凝胶层析柱纯化后,得纯化灵杆菌脂多糖。通过紫外分光光谱法与高效液相色谱法对分离的灵杆菌脂多糖进行纯度分析。结果表明,样品基本无蛋白、核酸类杂质,组成成分与己报道的灵杆菌脂多糖相近,为进一步研究提供实验依据。(5)分离纯化的灵杆菌脂多糖对供试菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、酵母菌、白色念珠菌)进行体外抑菌活性研究。结果表明,灵杆菌脂多糖对供试菌均有抑制作用,但抑制作用强度受灵杆菌脂多糖浓度的影响显著,浓度过低时无明显抑制作用;灵杆菌脂多糖对细菌的抑制作用强于真菌,对霉菌抑制作用最弱。