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猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus 2，PCV2)是断乳仔猪多系统衰竭综合症(post-weaning multi-systemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原。它不但可以引起断奶仔猪衰竭、死亡，还与仔猪A2型先天性震颤(congential tremor type AⅡ，CT)、怀孕母猪流产(reproductive failure)、成年猪皮炎肾炎综合征(porcine dermatitis and nephropathy, PDNS)和呼吸道疾病综合征(porcine respiratory disease syndrome，PRDS)有关。这些疾病的广泛流行严重影响了养猪业，给世界上养猪国家和地区带来巨大损失，更为严重的是PCV2还可引起免疫抑制，导致其它病原的混合感染，造成的间接损失难以估计。
本论文的试验由两部分组成，一是从疑似病料里一次性克隆得到PCV2的全基因组序列，二是亚克隆PCV2的ORF1基因，并在pET-28a(+)中进行了原核表达。
1.参照国外发表的猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)全基因组序列，设计一对特异性引物，利用该室保存的疑似断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)病料为模板，从中提取PCV2基因组DNA，并以之为模板进行PCR(polymerase chain reaction)扩增。将扩增得到的全基因片断克隆到pMD18-T载体上，经蓝白斑筛选和重组质粒PCR鉴定出阳性克隆并进行序列测定与分析，阳性质粒命名为PCV2 all。用DNAstar工具将其与GenBank上国内外毒株进行了序列比较。结果表明扩增出了1767bp的片段，序列分析表明与国内外毒株核苷酸同源性为高达99.6％。
2.PCV2的ORF1基因是PCV2基因组中最大的一个阅读框，编码病毒复制相关蛋白，也称为Rep基因。设计一对特异性引物，以克隆得到的PCV2 all为模板，利用PCR技术，扩增出了945bp大小的ORF1基因片断，亚克隆到pMD18-T载体上，分别对阳性质粒和表达载体进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切，将ORF1片断以正确读码框插入pET-28a(+)中，构建了重组质粒pET-ORF1。经IPTG诱导，成功表达了ORF1基因编码的蛋白。表达的蛋白为融合蛋白，分子量大约为41KD。经Western-blot检测，重组蛋白可被阳性血清识别。