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本文以粗糙龙胆（Gentiana scabra Bunge）为试材，采用常规方法结合现代植物化学分离手段，对其部分化学成分分离及结构鉴定，建立龙胆提取工艺及龙胆提取物HPLC指纹图谱。为龙胆资源的高效开发及可持续利用提供理论及方法学参考。为此，开展本项研究，并取得了如下进展：1．采用（常压、中压）柱色谱对龙胆提取物过大孔树脂的10％、20％、50％乙醇洗脱部分进行中压柱层析及常压柱层析分离，得到六个化合物A1、A2、A3、A4、A5、A6，经理化鉴定和有机波谱鉴定，确定其化合物分别为：A1龙胆苦苷（Gentipicroside）、化合物A2与A3是同分异构体，推测化合物A2和A3分别为下述三种化合物其中之一，3’-O-β-D-Glucopyranosyl Gentiopicroside，4’-O-β-D-Glucopyranosyl Gentiopicroside，6’-O-β-D-Glucopyranosyl Gentiopicroside，A4，3-O-β-D-Glucopyranoside，5-O-[4-hydroxy-E-cinnamoyl-（6）-β-D-glucopyranoside]，A5，Sweroside；4’-O-[β-D-Glucopyranosyl-（1→3）-2，3-dihydroxybenzoyl]，2’，3’，6’-tri-Ac，A6，2，3-Dihydroxybenzoic acid；3-Me ether，β-D-glucopyranosyl ester。同时从时间、耗能、前处理等方面，对常压柱层析、中压柱层析、高速逆流色谱三种方法制备龙胆苦苷进行了比较，得出高速逆流色谱法是较有效的一种方法。2．首次应用高速逆流色谱（HSCCC）对龙胆中龙胆苦苷进行了制备性分离。以氯仿-甲醇-正丁醇-水（5：4：2：4）为溶剂系统，下相作流动相，主机正转，转速820r／min，流速2mL／min，同定相保留率38％，龙胆苦苷保留时间为320～380min，经HPLC检测，纯度可达96.68％。3．以不同浓度的溶剂、超声提取时间、料液比为三因素，进行L9（34）因素、水平正交设计，确定以50％乙醇为溶剂、料液比1：8、超声清洗30min为最优提取工艺，得膏率为45.90％，龙胆苦苷含量5.456％。4．建立龙胆提取物HPLC指纹图谱。色谱条件：色谱柱Hypersil ODS5um（4.6mm×250mm）；以流动相A：甲醇，B：水，梯度洗脱，0～30min，A：20～80％；30～45min，A：80～20％；45～55min，A：20～20％：检测波长270nm；流速1mL／min；柱温35℃。根据10批次供试品测定结果，经与参照物对照，以及比较所有测定和记录的色谱图，标定共有指纹峰10个，指纹图谱相似度均大于0.90。本文创新点：1．首次采用中压柱层析色谱技术对龙胆化学成分进行制备性分离研究，并建立二氯甲烷-甲醇中压梯度洗脱模式。为龙胆环烯醚萜类化学成分分离提供技术参考。2．首次采用HSCCC分离制备龙胆苦苷。建立一种分离龙胆苦苷的新方法。3．首次建立龙胆提取物HPLC指纹图谱。给龙胆提取工艺提供质量标准。