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研究背景:胃癌是一个全球性的健康问题,目前是世界第五大最常诊断的肿瘤,位列肿瘤死因第三位。它是我国第二常见的肿瘤,位列肿瘤死因第二位。临床上,晚期胃癌预后差,5年总生存率仅15%。分子靶向治疗是近年来胃癌治疗研究的热点。肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）是一种具有多效性的细胞因子,在促进血管生成、免疫应答、细胞运动和细胞分化方面具有重要作用。HGF在多种肿瘤中表达上调,与肿瘤的发生发展密切相关。微小核糖核酸（micro RNAs,miRNAs）是长约22个核苷酸、高度保守、非编码的RNA分子,通过关闭基因或者在转录后水平抑制m RNA翻译或介导m RNA的降解来调节基因表达。miRNAs可以靶向与癌症生理、病理特征几乎所有方面密切相关的靶点,在肿瘤的发生和进展中扮演重要角色。我们的前期研究结果显示,与健康人群相比,miR-15a/16/195在胃癌患者的血清中表达降低,且表达量与胃癌分期具有相关性,分期越晚,降低越明显。提示miR-15a/16/195在胃癌中发挥抑癌作用,但其潜在机制有待明确。研究目的:本研究目的在于明确miR-15a/16/195在胃癌中的表达水平,并验证其对胃癌细胞增殖、迁移功能的影响;明确HGF在胃癌中的表达水平,探索miR-15a/16/195对HGF的靶向调控作用并验证miR-15a/16/195-HGF轴对于胃癌细胞迁移、增殖功能的影响,为胃癌靶向治疗提供新的理论依据。研究方法:1.胃癌患者术后组织:收集天津医科大学肿瘤医院胃癌患者术后癌组织及配对癌旁组织,使用免疫组化（IHC）和免疫印迹（WB）方法检测HGF蛋白表达水平,利用高通量测序筛选胃癌特异的miRNA,并使用q RT-PCR检测HGF m RNA及miR-15a/16/195表达水平。2.靶点预测:使用三种生物信息学软件Pic Tar、miRanda和Target Scan预测靶向HGF m RNA的潜在miRNA,并取交集。3.荧光素酶报告基因实验:验证miR-15a/16/195与HGF m RNA的直接结合。4.胃癌细胞系:研究miR-15a/16/195-HGF通路对胃癌细胞迁移及增殖的作用。使用WB检测HGF蛋白表达。使用q RT-PCR方法检测HGF m RNA及miR-15a/16/195表达水平。使用细胞划痕实验和Transwell实验检测胃癌细胞迁移能力,使用Ed U实验检测胃癌细胞的增殖能力。5.胃癌裸鼠移植瘤模型:进一步验证miR-15a/16/195-HGF通路对胃癌细胞迁移及增殖的作用。将对照组SGC7901、分别过表达miR-15a/16/195和HGF的SGC7901植入裸鼠皮下,4周后处死,剥离肿瘤。测量肿瘤直径、重量,检测瘤组织中miR-15a/16/195及HGF表达水平。研究结果:1.胃癌患者术后组织:与邻近正常组织相比,胃癌组织中miR-15a/16/195表达水平明显降低,HGF表达水平明显升高。HGF m RNA在癌组织和邻近正常组织中表达水平无明显差异。2.靶点预测:使用生物信息学软件预测miR-15a/16/195是可能靶向HGF m RNA的潜在miRNA,miR-15a/16/195可与HGF的3’-UTR区域特异结合。3.荧光素酶报告基因实验验证:在野生型HGF中,miR-15a/16/195 mimics处理组荧光值显著降低,而miR-15a/16/195 inhibitors处理组中,荧光值显著升高。在突变型HGF中,miR-15a/16/195 mimics、NC mimics、miR-15a/16/195inhibitors、NC inhibitors四种处理组,荧光均都无明显变化。结果证实miR-15a/16/195可以靶向抑制HGF表达,二者呈负向调控的关系。4.胃癌细胞系:转染miR-15a/16/195 mimics和miR-15a/16/195 inhibitors后,可以过表达或者沉默miR-15a/16/195的表达。细胞功能实验证实过表达miR-15a/16/195后,可以抑制胃癌细胞系SGC7901的迁移、增殖能力;相反,沉默miR-15a/16/195后,可以促进胃癌细胞的迁移、增殖。过表达/沉默miR-15a/16/195后,可以下调/上调HGF的表达,而HGF m RNA的表达水平没有变化。转染pc DNA.HGF（OE.HGF）和si RNA.HGF（si.HGF）,可以过表达或者沉默HGF的表达。过表达HGF后,可以促进胃癌细胞系SGC7901的迁移、增殖能力;相反,沉默HGF后,可以抑制胃癌细胞的迁移、增殖。回复实验:同时高表达miR-15a/16/195和HGF,与仅miR-15a/16/195高表达的细胞相比,HGF蛋白表达升高,但是低于OE.NC对照组,即可以部分拯救HGF蛋白表达。同时高表达组由于转染OE.HGF,HGF m RNA水平增高,而miR-15a/16/195高表达组和对照组,HGF m RNA水平无变化。回复实验也可以部分挽救SGC7901的迁移、增殖能力。5.胃癌裸鼠移植瘤模型:与未经干预的对照组相比,过表达miR-15a/16/195细胞成瘤组织中,miR-15a/16/195水平上调,HGF蛋白表达降低,肿瘤最小;过表达HGF细胞成瘤组织组,miR-15a/16/195水平无变化,HGF蛋白表达升高,肿瘤最大,生长最快。与细胞实验的结果一致。研究结论:miR-15a/16/195通过靶向HGF抑制胃癌细胞的迁移及增殖。