【摘 要】
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为了从可能的差异表达基因入手研究甘蓝型油菜幼叶黄化突变体Cr3529黄化性状的成因,从本实验室构建的野生型3529——突变体Cr3529正向抑制性消减杂交(suppression subtractiv
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为了从可能的差异表达基因入手研究甘蓝型油菜幼叶黄化突变体Cr3529黄化性状的成因,从本实验室构建的野生型3529——突变体Cr3529正向抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization, SSH)文库中选取了33个克隆进行序列分析。测序结果显示,33个克隆中,7、14号克隆为重复的克隆,二者大小相同,且只有一个碱基的差异;15、18号克隆为同一基因的不同片段;其余均为独立的克隆。BLASTn和BLASTx分析的结果表明,11、22、31号克隆与捕光色素chla/b结合蛋白同源,3、17分别与PSⅡ反应中心及其相关的蛋白同源,另外15和18号克隆与推测的chl P基因有着较高的同源性,该基因被认为参与叶绿素的合成。由此可以初步证实本实验室关于突变体的黄化性状与光合作用,特别是叶绿素的合成相关的推测。此外,对其余克隆的序列分析表明,这些克隆涉及到氨基酸代谢、糖代谢、脂肪酸代谢等多个代谢过程,初步说明了黄化性状还可能涉及到各个代谢途径。 为了研究反向消减文库中一个未知基因功能,利用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术,在已知片段的基础上,对该基因的5’端cDNA进行了扩增,经过两轮PCR得到了该基因5’端约1000bp的序列,将之与原有已知片段拼接得到一个大小为1343bp的片段,序列分析发现该片段的1～1299位碱基为基因编码区;BLAST分析表明,该基因与来自拟南芥的一个编码未知蛋白质的基因(GenBank登录号At4g01080)同源性达80.1%,但由于单个碱
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