论文部分内容阅读
该文以得到高品质的大豆异黄酮为主要目标,针对其提取、纯化及检测方法进行了深入的探索和研究,力图寻找最经济的提取纯化工艺.研究结果为大豆异黄酮的合理有效利用提供了有价值的参考依据,具有一定的理论意义和较大的实际应用价值.该文以大豆豆粕为原料,第一种方法是采用乙醇回流浸提,然后用HCl水解,得到异黄酮粗提物.正交试验结果表明,先用65﹪乙醇、固液比1:8、在65℃的条件下回流搅拌浸提4h,再用0.2mol/LHCl、原料与盐酸比1:6、在85℃条件下搅拌水解2h,异黄酮的提取量为4.92mg/g豆粕,粗提物中异黄酮的含量为2.75﹪.水解后异黄酮的提取量是未水解时的3倍,说明在用乙醇提取后再进行水解是非常有必要的.第二种方法是采用超声波提取,即用160mL 65﹪乙醇超声(33kHz)提取20g豆粕,处理45min,再用盐酸水解,提取量为4.65mg/g豆粕,异黄酮含量为2.58﹪.与乙醇浸提法相比,虽然超声波提取效果稍微逊色,但优点是处理时间较短.该文确立了聚酰胺薄层层析法、紫外分光光度法及高效液相色谱法等手段定性分析异黄酮的条件.在聚酰胺薄层层析法中,选择以乙醇-水-甲酸(4:1:0.1)为展开剂,染料木甙的Rf值为0.70、大豆甙元的Rf值为0.51、染料木素的Rf值为0.43.紫外分光光度法及高效液相色谱法的扫描结果显示,染料木甙、染料木素的最大吸收峰位置均在259nm左右,而大豆甙元的最大吸收峰为248nm左右,且在303nm处有一肩峰,以此特征峰可以鉴定出三种异黄酮.该文确立了以染料木素为标准物,用紫外分光光度法和高效液相色谱法定量分析异黄酮的新体系.紫外分光光度法的回收率为95.7﹪.通过改变流动相组成、流速及柱温等条件,研究得到了高效液相色谱法测定异黄酮的条件:色谱柱Waters RP18(5 μ m,3.9×150mm),流动相甲醇:水:磷酸=52:48:0.2,柱温30℃,流速0.7mL/min,检测波长260nm.该法的回收率为99.3﹪,变异系数小于3﹪.该文确立了LSA-10型大孔吸附树脂纯化异黄酮的工艺条件.通过比较五种不同吸附树脂的吸附和解吸特性,发现LSA-10型树脂的效果最好.其纯化异黄酮的最佳工作条件为:上柱液浓度0.1mg/mL、上柱液pH值4~5、上柱量4BV、吸附流速1.5mL/min、静态吸附4h、然后用水洗去糖等杂质,再用75﹪乙醇作为解吸剂、解吸流速为0.7mL/min.将收集液干燥得到纯化物,其中异黄酮的含量为58.2﹪.