[目的]1、培养高纯度的原代小胶质细胞和星形胶质细胞,为进一步研究他们在中枢神经系统疾病中的作用和机制奠定基础。2、关于星形胶质细胞激活后的表型变化研究相对较少,我们将用不同的方法激活星形胶质细胞,在体外探寻激活星形胶质细胞的方法,并检测激活后的星形胶质细胞表型,为进一步研究星形胶质细胞在神经系统疾病中的作用提供细胞模型。[方法]实验分为两个部分,第一部分为小胶质细胞和星形胶质细胞的原代培养、纯化及鉴定;第二部分为不同方法激活星形胶质细胞的表型变化。小胶质细胞和星形胶质细胞的原代培养:选用24小时内新生的雄性及雌性C57BL/6小鼠,在解剖显微镜下分离双侧大脑的皮层剪碎、消化、终止、离心、重悬后加入培养瓶中进行培养,24h后全量换液,以后每隔3天半量换液一次。小胶质细胞和星形胶质细胞的纯化:待培养瓶中的细胞密度达到90%-100%后（约12-14天）,对细胞进行纯化,利用小胶质细胞和星形胶质的细胞贴壁能力以及透光性之间有差异的特点进行纯化。免疫荧光法鉴定小胶质细胞和星形胶质细胞:待爬片完成后24h,使用Iba-1抗体对培养的原代小胶质细胞进行免疫荧光鉴定,使用GFAP抗体对培养的原代星形胶质细胞进行免疫荧光鉴定,使用CellSens软件合成图片进行共定位分析,使用Imagine J软件统计细胞密度进行定量分析。星形胶质细胞的激活及表型分析:星形胶质细胞的炎症模型制作共分为三组:LPS组、小胶质细胞培养基组（以下简称为条件培养基组）以及对照组。LPS组加入1 μ g/ml的LPS对TNC进行刺激;条件培养基组加入1μg/ml的LPS刺激小胶质细胞4h,然后收集其上清液刺激TNC;对照组加入等量的完全培养基。[结果]1、原代小胶质细胞在培养14天后在倒置显微镜下可观察到混合胶质细胞培养物中细胞生长出现分层现象,上层生长的圆形、折光性强的小细胞即为小胶质细胞。采用Iba-1抗体进行免疫荧光染色鉴定,纯度为:96.17±2.35%,达到实验要求。2、原代星形胶质细胞在培养14天后在倒置显微镜下可观察到位于底层的扁平、多角形、具有多个细长或粗短突起的大细胞,即为星形胶质细胞。采用GFAP抗体进行免疫荧光染色鉴定,纯度为95.84±2.50%,达到实验要求。3、采用LPS和LPS刺激BV-2细胞4h后收集的培养基上清液分别刺激TNC细胞,结果显示:单纯LPS刺激下,TNC细胞激活不明显,采用星形胶质细胞激活标记物S100 β染色,结果显示绝大多数星形胶质细胞未激活（S100 β+/DAPI+=4.88±1.95%）。LPS刺激BV-2细胞所产生的条件培养基组可显著激活星形胶质细胞（S100 β+/DAPI+=94.75±2.05%）,两组相比差异显著（P<0.001）。进一步采用星形细胞A1亚型抗体C3检测条件培养基激活后星形胶质细胞分化表型,免疫荧光法检测,显示培养基组的星形胶质细胞大多数被激活为A1型（C3+/DAPI+=86.64±4.34%）。在小胶质细胞中,LPS组在低剂量组中小胶质细胞被迅速激活,成为反应性小胶质细胞,形态发生明显变化,由“细长杆状”变为“圆球形阿米巴样”。[结论]1.按本文提及的培养方法,可成功培养原代星形胶质细胞与小胶质细胞,纯度达95%以上,且细胞数量稳定、状态良好。2.LPS直接刺激不能有效激活星形胶质细胞。3.采用LPS刺激BV-2细胞的培养液可有效激活TNC细胞,且85%以上星形胶质细胞向A1型分化,可用于炎症反应相关的神经系统疾病的科学研究。