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急性肺损伤（ALI,acute lung injury）及其更为严重的表现形式急性呼吸窘迫综合征（ARDS,acute respiratory distress syndrome）已被公认为是发病迅速、危及生命的疾病,发病覆盖所有年龄段,在全球有着高发病率和高死亡率,缺乏适当的治疗药物。ALI的病因很复杂且众多,革兰氏阴性菌感染相关的ALI所占比例很大,其致病因素主要为内毒素。衢枳壳被列入《浙江省中药炮制规范》2015版地方习用来源品种,又于2018年入选新“浙八味”,使其有了正式合法的药用身份。衢枳壳为芸香科植物常山胡柚Citrus changshan-huyou Y.B Chang的干燥未成熟果实,主产于浙江省衢州市常山县。在产地,衢枳壳作为中药民间习用由来已久,它的未成熟果实主要用于治疗脾胃气滞证的消化系统疾病,其成熟果实主要用于治疗有痰或无痰咳嗽等呼吸系统疾病。该课题以衢枳壳提取液（QFAE）为研究对象,采用脂多糖（LPS）诱导RAW 264.7细胞、五水硫酸铜（CuSO4·5H2O）诱导转基因中性粒细胞荧光斑马鱼、LPS诱导小鼠ALI三个炎症模型,阐述QFAE的抗炎作用及抗炎机制。一、QFAE在小鼠呼吸道炎症中的保护作用首先,采用高效液相色谱法（HPLC）检测了QFAE中柚皮苷的含量,并以此作为质量控制和给药定量的标准。其次,采用CuSO4·5H2O诱导的转基因中性粒细胞荧光斑马鱼模型评价QFAE的抗炎活性。在CuSO4·5H2O诱导的斑马鱼中,QFAE通过减少炎症部位的中性粒细胞数表现出显著的抗炎作用。又研究了QFAE对LPS诱导的RAW 264.7细胞和ALI小鼠的抗炎作用。QFAE可显著性减少ALI小鼠肺泡灌洗液（BALF）中的总细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数量,可有效缓解肺泡塌陷、中性粒细胞浸润、肺W/D比、髓过氧化物酶（MPO）蛋白表达等肺组织学变化以及血液学变化。在体内实验和体外实验用QFAE治疗后,显著性降低了促炎细胞因子水平TNF-α、IL-6、IFN-γ、MCP-1和IL-12p70,并明显升高了抗炎细胞因子水平IL-10。综上研究结果表明,QFAE对CuSO4·5H2O诱导的斑马鱼、LPS诱导的ALI小鼠和RAW 264.7细胞均具有显著的抗炎作用。二、QFAE在小鼠呼吸道炎症中的抗炎机制首先,采用HPLC测定了QFAE中的圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、辛弗林等成分,并以此作为质量控制和给药定量的标准。其次,研究了QFAE对LPS诱导的RAW 264.7细胞和ALI小鼠的抗炎机制通路。QFAE显著性抑制了LPS诱导的RAW 264.7细胞中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和转录因子-κB（NF-κB）信号通路,而有效激活了腺苷酸-活化蛋白激酶（AMPK）信号通路,表现为显著性减少了ERK、JNK、p38、p65、IκBα、RSK和MSK的磷酸化,而明显增强了ACC和AMPKα的磷酸化。在体内外实验中,QFAE的预处理均显著性抑制了促炎细胞因子水平TNF-α、IL-6和IL-1β,并显著升高了抗炎细胞因子水平IL-10。此外,QFAE可有效改善ALI小鼠BALF中的中性粒细胞和巨噬细胞数量,减轻肺组织病理改变以及血液学改变。QFAE预处理显著性抑制了LPS刺激的ALI小鼠中的MAPK和NF-κB信号通路,同时激活AMPK信号通路,表现为显著性抑制ERK、JNK、p38、p65和IκBα的磷酸化,而明显促进ACC和AMPKα的磷酸化。综上研究结果表明,QFAE具有显著的抗炎作用,其抗炎机制与MAPK/NF-κB/AMPK信号通路有关。该课题从体外实验及体内实验系统地研究了QFAE对LPS诱导RAW 264.7细胞、CuSO4·5H2O诱导转基因中性粒细胞荧光斑马鱼、LPS诱导小鼠急性肺损伤三个炎症模型的抗炎作用,且其抗炎机制与LPS介导的MAPK/NF-κB/AMPK信号通路有关。