论文部分内容阅读
目的：进一步研究不同浓度SPIO标记大鼠骨髓间充质干细胞对其生物学活性及分化能力及体外MRI成像效应的影响,为SPIO成功应用临床提供实验基础。方法：采用全骨髓贴壁筛选法,分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞((rMSCs),待细胞传至第4代时,用0.75μg/ml多聚赖氨酸(PLL)包裹25μg/ml,50μg/ml,100μg/mlSPIO,并用PLL-SPIO孵育细胞24h、48h、72h。孵育结束后进行普鲁士染色、铁含量测定、透射电镜等实验,来检测细胞SPIO标记率；采用3.0TMRI(T1WI、T2WI、T2*WI)扫描25μg/ml,50μg/ml,100μg/mlSPIO标记细胞,并运用MRI自动测量系统,测量每种扫描序列图像信号强度,来检测不同浓度SPIO标记细胞具体成像的差异；细胞周期、凋亡等实验,来检测SPIO对细胞活性的影响；细胞分化诱导实验(成脂、成骨、成软骨、成内皮)来检测SPIO对细胞分化能力的影响。结果：普鲁士染色：25μg/ml组标记率(%)分别为70.1±9.4、75.5±8.6、76.3±7.9,与50μg/ml组、100μg/ml组相比不具有有统计学差异(P>0.05)。铁含量测定：25μg/ml组细胞含铁量(pg/cell)为14.4±1.05、14.9±0.7、16.9±0.08,与50μg/ml组、100μg/ml组相比不具有有统计学差异(P>0.05)。透射电镜标记：胞质内可见许多囊泡样包涵体,囊泡内有浓聚细小的铁颗粒。MRI扫描：T1WI、T2WI和T2*WI序列信号均呈低信号。其中,扫描106细胞,25μg/ml组、25μg/ml组、25μg/ml组信号平均降低(65.6±7.9)%、(70.2±0.8)%、(72.7±10.3)%,25μg/ml组与50μg/ml组、100μg/ml组不具有统计学差异(P>0.05)。100μg/ml组rMSCs增殖指数(%)分别为19.9±1.4、10.1±0.3、9.5±0.2,与未标记细胞间有统计学差异(P<0.05)。对照组、25μg/ml组、50μg/ml组和100μg/ml组细胞vWF图像灰度值分别为54.7±5.5、53.9±7.9、51.1±3.4、35.6±8.7。其中,仅100μg/ml组与未标记细胞间有统计学差异(P<0.05)。结论：0.75μg/ml多聚赖氨酸(PLL)包裹(25μg/ml)SPIO,孵育rMSCs24h即可有效标记rMSCs.其中,100μg/ml SPIO孵育rMSCs24h即可明显影响细胞生物学活性和分化能力。临床MRI(T1WI、T2WI、T2*WI)扫描SPIO标记细胞,信号改变明显,图像清晰。其中,T2*WI序列最敏感,25μg/ml组就可以引起明显的信号改变。