肝癌患者呼气中挥发性标志物的定量分析研究与呼气诊断函数模型的建立

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目的建立呼气检测方法学,筛选肝癌患者的挥发性标志物,评价它们诊断肝癌的临床价值,并分析这些标志物在肝癌不同分期和不同AFP水平中浓度情况,最后尝试建立肝癌呼气诊断函数模型。方法使用固相微萃取/气相色谱/质谱联用法对同一健康人的呼气样品进行检测分析,建立呼气检测技术平台。用Tedlar?采样袋收集30份肝癌患者呼气样品,收集27份肝硬化患者和36份健康人的样品作为对照,同时收集周围空气作为参照。经该技术检测样品中的挥发性有机化合物(volatile organic compounds,VOCs),通过比较健康人与肝癌患者呼气中的VOCs,筛选肝癌的挥发性标志物,使用标准曲线法定量,Mann-Whitney U检验进行组间比较,通过ROC曲线评估它们用于临床肝癌诊断的可行性。用Fisher判别分析建立肝癌诊断函数,通过留一法或对训练组进行组内回代及对验证组进行分类,评估该模型的诊断效力。结果固相微萃取-气相色谱/质谱联用能够满足呼气检测的技术要求。与健康人相比,肝癌患者呼出气体中,有6种VOCs存在显著性差异(P<0.05),分别是:3-羟基-2-丁酮、甲苯、乙基苯、二甲苯、苯乙烯、癸烷。3-羟基-2-丁酮、苯乙烯、癸烷对肝癌可能具有诊断价值,其中3-羟基-2-丁酮用于肝癌的诊断价值最高,它在健康人、肝硬化和肝癌组患者呼气中的浓度依次升高。在健康人与肝癌中,3-羟基-2-丁酮诊断肝癌的灵敏性与特异性可达到83.3%与91.7%;在肝硬化与肝癌人群中,诊断肝癌的灵敏度与特异度可以达到70.0%与70.4%。苯乙烯在健康人与肝硬化组中的浓度差异无显著性(P>0.05);癸烷在肝硬化与肝癌组间的差异亦无显著性(P>0.05)。AFP>400ng/ml与AFP<400ng/ml的肝癌患者呼气中,这3种VOCs的浓度差异无显著性(P>0.05),在Ⅰ~Ⅱ期与Ⅲ~Ⅳ期肝癌患者呼气中,这3种VOCs的浓度差异亦无显著性(P>0.05)。使用3-羟基-2-丁酮、苯乙烯和癸烷建立的肝癌二分类诊断函数模型,诊断肝癌的灵敏性与特异性可达到86.7%与91.7%。结论通过固相微萃取/气相色谱/质谱联用技术,我们建立了呼气检测的技术平台。使用该技术,筛选出了3-羟基-2-丁酮、苯乙烯和癸烷作为肝癌的挥发性标志物,它们与临床分期及AFP无相关性,可用于肝癌的早期诊断。使用这些标志物建立的肝癌二分类诊断函数模型诊断肝癌的灵敏性与特异性较高。
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