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背景:酒精性肝病初期表现为脂肪肝,可发展成肝炎、肝纤维化和肝硬化,甚至肝功能衰竭、肝癌。研究表明柚皮素可清除自由基,保护细胞中的核酸、蛋白质、脂肪等的正常形态和功能,在降血脂、改善体内脂肪代谢等方面具有较强的生物活性。柚皮素能改善脂肪代谢,但目前还没有相关研究探讨柚皮素对酒精性脂肪肝的作用。斑马鱼幼鱼急性酒精性脂肪肝模型比传统小鼠模型操作简单、耗时少、易于观察、所需实验样品用量少、用药简单,在实验研究中更具有优势。小窝蛋白(Caveolin-1,Cav-1)在细胞内胆固醇运输及脂质代谢中发挥着重要作用,并参与肝脏疾病的发生发展。CRISPR/Cas9系统是目前最常用的基因编辑技术,各种斑马鱼突变体已广泛用于实验研究,但目前还没有小窝蛋白基因缺陷斑马鱼突变体的相关研究。目的:研究柚皮素及cav-1基因调控对斑马鱼急性酒精性脂肪肝模型的作用,构建cav-1基因缺陷斑马鱼突变体。方法:通过显微注射cas9 mRNA和cav-1向导RNA到斑马鱼单细胞胚胎中,使CRISPR/Cas系统对cav-1基因序列进行靶向切割,构建cav-1基因缺陷斑马鱼突变体。把4天的斑马鱼浸泡于2%酒精中32小时构建急性酒精性脂肪肝斑马鱼模型,造模后加入不同浓度(2.5mg/L、5mg/L、10mg/L)的柚皮素干预48小时。通过整体油红O染色及石蜡切片HE染色评估模型及柚皮素的干预效果;通过石蜡切片TUNEL染色观察各组斑马鱼的细胞凋亡情况;通过Real-time Quantitative PCR 和 Western Blot 检测 cav-1 mRNA 和蛋白表达水平,初步探究柚皮素的作用机制。结果:通过CRISPR/Cas系统成功对斑马鱼cav-1基因序列完成定点切割,导致该基因目标靶点出现突变,建立cav-1基因缺陷斑马鱼突变体;突变基因序列具有遗传性。斑马鱼整体油红O染色及石蜡切片HE染色均显示野生型斑马鱼幼鱼经2%酒精处理32小时后肝脏发生了严重的脂肪变性;再经过不同浓度的柚皮素干预48小时后,肝脏脂肪病变有不同程度减轻,且减轻程度与药物浓度相关。石蜡切片TUNEL染色可见模型组细胞凋亡,而对照组及药物组均未见明显的凋亡信号。模型组中cav-1 mRNA和蛋白水平比对照组明显升高,药物组则较模型组明显下降。结论:通过CRISPR/Cas系统成功构建了 cav-1基因缺陷斑马鱼突变体,突变基因序列具有遗传性。成功复制斑马鱼幼鱼急性酒精性脂肪肝模型并通过该模型发现柚皮素对斑马鱼酒精性脂肪肝有显著治疗作用,治疗效果与浓度相关;初步推断其治疗作用可能与cav-1基因调控和减少细胞凋亡有关。