提高乳酸菌肠道定植能力是乳酸菌研究及应用中迫切需要解决的问题。本论文选取实验室构建的两个BSH活性较高的重组乳酸菌开展胆盐水解酶BSH对乳酸菌肠道定植能力及其黏附特性的研究。首先,通过动物实验研究BSH重组乳酸菌在小鼠肠道内定植能力。将Rif抗性突变的实验菌株制备菌悬液,灌胃小鼠,小鼠粪便中实验菌株活菌计数结果显示BSH重组乳酸菌在肠道内定植的时间(6 d)较对照组(4 d)明显延长,初步确定了 BSH具有提高乳酸菌肠道定植能力的作用。其次,选取Caco-2细胞构建黏附模型研究BSH重组乳酸菌与肠道细胞的黏附性,探究BSH提高乳酸菌肠道定植能力的原因。将BSH重组乳酸菌与Caco-2细胞共孵育,对黏附前后的实验菌株进行染色观察、平板活菌计数及通过酶标仪测菌浓度吸光值来确定黏附率,定性观察和定量测定BSH重组乳酸菌对Caco-2细胞的黏附能力。实验结果显示BSH重组乳酸菌与Caco-2细胞黏附性明显优于对照组,BSH活性相对较高的一株菌WCFS1Rif[pSIP403::B4bshb]的黏附数最高,为(14.57±1.34)cfu/cell,其次是菌 WCFS1Rif[pSIP403::M6bshc],黏附数为(9.21±0.95)cfu/cell,而对照组菌 WCFS1Rif[pSIP403]的黏附数仅为(1.63±0.52)cfu/cell。本研究明确了 BSH可增强乳酸菌与肠道细胞的黏附性,揭示了 BSH提高乳酸菌肠道定植能力的作用机制。最后,研究了 BSH重组乳酸菌对致病菌的黏附抑制作用。将致病性沙门氏菌与Caco-2细胞共孵育,同时加入BSH重组乳酸菌,分别对三种作用方式(竞争、排斥、置换)进行研究,通过平板活菌计数定量分析BSH重组乳酸菌对于沙门氏菌与Caco-2细胞的黏附情况的影响,实验结果显示BSH活性高的重组乳酸菌对沙门氏菌的黏附抑制作用最强,且以排斥作用的抑菌效果最好,黏附数由(1.61±0.26)cfu/cell降低至(0.88±0.07)cfu/cell。本研究不仅从一个侧面验证了BSH可增强乳酸菌与肠道细胞的黏附性,也为BSH相关功能的应用研究提供了一个良好的研究实例。综上所述,本课题研究了 BSH提高乳酸菌肠道定植能力及其黏附特性,不仅推动了 BSH功能研究进程,也为生产上乳酸菌的开发利用提供了理论依据。