【摘 要】
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采用盐析法和双水相萃取技术从钝顶螺旋藻中分离纯化藻蓝蛋白(C-Phycocyanin,C-PC)。通过对传统盐析工艺的优化改进,确定了分段盐析C-PC所需硫酸铵的梯度饱和度,结果表明:经
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采用盐析法和双水相萃取技术从钝顶螺旋藻中分离纯化藻蓝蛋白(C-Phycocyanin,C-PC)。通过对传统盐析工艺的优化改进,确定了分段盐析C-PC所需硫酸铵的梯度饱和度,结果表明:经过四步硫酸铵盐析,C-PC纯度为3.55,回收率为47.13%。进一步增加盐析次数,C-PC纯度增加不明显,而回收率显著下降。盐析法分离C-PC的最高纯度为3.96,回收率为9.66%。双水相萃取是近年来发展起来的蛋白纯化新方法。采用双水相体系直接从C-PC粗提液中分离纯化C-PC,研究了双水相的类型、成相盐的种类、聚合物的平均分子量和浓度、成相盐的浓度、体系pH以及中性盐的类型和浓度对C-PC分配影响,确定了分离纯化C-PC的双水相类型为聚合物/盐系统,成相盐为酒石酸钾钠,萃取C-PC的最佳条件是:聚乙二醇浓度为16%(w/w),平均分子质量为2000,酒石酸钾钠浓度为21%(w/w),体系pH为6.0。双水相萃取次数的增加有利于C-PC纯度提高,三次双水相萃取后,C-PC纯度为3.91,回收率为83.57%。双水相萃取技术与二步盐析相结合可获得纯度为5.01的C-PC。以壳聚糖和海藻酸钠为囊材,对纯化后的C-PC进行微囊,通过实验确定了制备C-PC微囊的最佳工艺条件是:壳聚糖的脱乙酰度为74%,转速600r/min,搅拌时间30min,针头距离凝胶浴液面10cm,滴加速度30滴/min,海藻酸钠浓度2.5%(w/v),壳聚糖浓度0.6%(w/v),C-PC/海藻酸钠1/4(w/w),CaCl2浓度2.0%(w/v)。
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