苹果渣及大葱根中活性成分分离分析及对帕金森模型小鼠的神经保护作用研究

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苹果和大葱是常见的水果及蔬菜,在我国资源丰富,产量巨大,具有良好的经济效益。但其副产物苹果渣和大葱根的大量堆积却造成了一定的环境问题和资源浪费。苹果渣和大葱根中含有大量的活性成分,对这些活性成分进行提取、分离和纯化是实现这些副产物功能和价值的重要途径。异槲皮苷是苹果渣中功能成分的一种,在抗氧化、抗炎等活性方面有较好的效果。帕金森病(PD)是一种慢性的运动控制性神经疾病。研究认为其致病原理与线粒体功能障碍、炎症、氧化应激等相关,目前没有可以完全治愈PD的药物。因此,将异槲皮苷用于神经毒剂MPTP引发的帕金森模型小鼠,探究其是否对帕金森模型小鼠具有神经保护作用,是否可以阻止或延缓PD进程。大葱根中的活性成分包含挥发性成分挥发油和非挥发性成分黄酮类物质,本文采用气质联用(GC-MS)和全二维气质联用(GC×GC-TOF/MS)对大葱根中挥发性成分进行分析鉴定,并通过高速逆流色谱(HSCCC)从大葱根中分离黄酮类化合物。主要研究成果如下:1、建立了苹果渣中异槲皮苷的高效液相色谱(HPLC)分析方法和高速逆流色谱分离方法,从50 g苹果渣粉末中提取得到9.8 g粗提物,HSCCCC成功从苹果渣粗提物中分离得到纯度为96.85%的异槲皮苷。将异槲皮苷用于帕金森模型小鼠,选择爬杆、转棒等实验进行行为学评价,通过氧化应激、免疫荧光和免疫组化等实验进行分子水平的验证,发现异槲皮苷可以保护小鼠免受MPTP诱导的损伤,对帕金森模型小鼠具有神经保护作用,有望应用于治疗或改善帕金森病。2、大葱根中的挥发油是通过水蒸气蒸馏法得到的。50.00g的大葱根粉末产出126.9 mg挥发油,得油率为0.25%。经过一维GC-MS分析检测,确认出89种物质;全二维GC×GC-TOF/MS分析检测,确认出256种物质;二者均显示主要物质是含硫化合物。全二维GC×GC-TOF/MS的分离性能远高于GC-MS,具有更高的灵敏度,分辨率和峰容量,使大葱根挥发油成分的分析鉴定更加精确。3、优化了大葱根粗提物中黄酮类化合物的HPLC分析检测方法,建立了 HSCCC分离富集大葱根中黄酮化合物的方法。通过对不同的溶剂体系进行比较,选择了n-C6H14/CH3COOC2H5/CH3OH/H2O(3:7:5:5,v/v)体系为分离大葱根粗提物中目标物质的溶剂体系。一种目标活性物质成功从大葱根粗提物中分离出来,纯度为91.43%。其他5种目标物质纯度和含量大幅增加,得到了有效富集。
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