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目的:了解本地大肠埃希菌(Escherichia coli)对三类6种常用抗菌药物的耐药性以及外排泵acra/acrb基因在临床分离株中的存在情况,并探讨能量抑制剂碳酰氰间氯苯腙(CCCP)对两种氟喹诺酮药物在大肠埃希菌内最低抑菌浓度(MIC)的影响。方法:1.药物敏感实验:采用美国临床实验室标准委员会(NCCLS M100S9)推荐的纸片扩散法(K-B法)进行头孢噻肟(CTX)、氨曲南(ATM)、庆大霉素(G)、链霉素(S)、氨曲南(ATM)、环丙沙星(CIP),左氧氟沙星(LEV)6种抗生素的药物敏感性检测,结果参昭NCCLS标准判读,每次实验均用大肠埃希菌标准株ATCC25922质控。2.PCR技术检测大肠埃希菌携带acra,acrb基因的情况:采用Biospin细菌.基因组DNA试剂盒提取大肠杆菌DNA用于PCR反应模板,根据acra,acrb的序列设计两对引物,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,紫外线检测仪观察结果并送上海生工测序。3.常量肉汤稀释法测MIC:选取多耐药菌株10株及敏感菌株5株测试大肠杆菌对环丙沙星和左氧氟沙星的MIC。4.CCCP对环丙沙星和左氧氟沙星MIC的影响;每支试管药物稀释后加入10mmol/LCCCP15ul,再加菌液1m1至CCCP终浓度为75umol/L,37℃孵育18小时,对比加入抑制剂前后MIC值的变化。结果:1药敏实验结果:(1)71株大肠埃希菌对三类6种抗生素耐药结果:头孢噻肟(CTX)42株(59.15%)、氨曲南(ATM)22株(30.99%)、庆大霉素(G)47株(60.20%)、链霉素(S)29株(40.85%)、环丙沙星(CIP)52株(73.24%)、左氧氟沙星(LEV)45株(60.38%)。(2)β内酰胺类抗生素平均耐药率35.92%,交叉耐药率25.35%;氨基糖苷类平均耐药率50.41%,交叉耐药率39.44%;氟喹诺酮类抗生素平均耐药率率68.31%,交叉耐药率60.56%;(3)耐药模式中以多药耐药为主(51.11%),其表型以CTX+G+S+CIP+LEV(8株,11.27%)为主。2.基因检测结果:(1)不同耐药模式菌株中acra/acrb阳性率:多药耐药株89.00/80.08%,双耐株43.37/43.37%,单耐株55.56/44.44%,敏感株50.00/33.33%。acra/acrb阳性率在不同耐药模式菌株中根据卡方检验差异有统计学意义,多药耐株与双耐药株、单耐药株、全敏感株比较差异均有统计学意义。(2)相同耐药模式菌株中acra与acrb基因阳性率比较无明显差异。(3)各种抗生素耐药株中acra/acrb基因阳性率:CTX69.05/64.28%、ATM50.00/50.00%、G68.05/57.45%、S44.83/51.72%,、CIP 82.69/80.77%、LEV 75.56/71.77%。各种抗生素耐药株acra/acrb基因阳性率差异分别根据卡方检验有统计学意义,其中CIP与LEV间差异无统计学意义,但他们与其他四种抗生素比较差异有统计学意义。3.CCCP对两种氟喹诺酮类药物MIC的影响:加入CCCP前后多耐菌株的MIC有不同程度的缩小,均有统计学有意义,但敏感株MIC变化无统计学意义,而多耐菌株和敏感株的MIC值的变化差值经秩和检验差异有统计学意义。结论:1.本地大肠埃希菌对三类6种抗生素普遍耐药,并且存在明显的多药耐药和交叉耐药现象。2.外排泵基因acra和acrb是大肠埃希菌多药耐药的重要原因之一,也与氟喹诺酮的耐药性相关。3.主动外排泵抑制剂CCCP能够降低多耐药大肠埃希菌对氟喹诺酮类抗菌药物的MIC。