论文部分内容阅读
在世界上,恶性肿瘤的类型众多,但肺癌却是我们常见的。因癌症导致死亡的肿瘤类型中,无论是在男性当中,还是在女性中,肺癌都位居前列。非小细胞肺癌在肺癌的所有类型中所占比例较大。在肺癌所有类型中,约五分之四为非小细胞肺癌。有学者认为:细胞在肺组织中无法控制性的生长,有可能导致转移的发生。与其他癌症一样,肺癌的发生也是两类基因发生异常,即抑癌基因、癌基因,其中癌基因或抑癌基因功能发生失调,从而致使肺癌的发生。在诱发肺癌的因素中,吸烟成为重要原因。近年来,尽管医疗技术的不断进步和诊治水平的提高,但因肺癌缺乏早期症状和病变常累积在肺部深处,病人确诊时,多为中晚期,或已转移,从而患者错过了最佳治疗期,导致肺癌患者5年生存率未得到明显提高,对人类的身体康健造成了严重的影响。 Programmed cell death factor4即程序性细胞死亡因子4,又称程序性细胞凋亡因子4,是一个众所周知的肿瘤抑制基因,可在细胞核和细胞质中表达。其在转录、翻译、细胞凋亡中扮演着重要角色。它相继在多种肿瘤中被报道:其处于低表达的状态,如在肺癌、结肠癌、乳腺癌、食管癌、胃癌和卵巢癌等肿瘤中。这种状态常与肿瘤的进程和转移有着密切的关系。虽然近年来对PDCD4的相关研究已取得了很大的进展,但是在肿瘤中,PDCD4为什么表达下调及引起其下调的分子机制研究还不是很透彻。本课题组通过检索发现:关于PDCD4的相互作用蛋白报道很少,尤其在肺癌中。而相互作用的蛋白,可能在功能、机制及疾病的发生发展中存在有一定的关系。因此我们选定PDCD4的相互作用蛋白作为研究对象,通过实验明确证实与PDCD4相互作用的蛋白,探讨PDCD4相互作用蛋白在肺癌中的表达及与PDCD4的相关性,这为研究肺癌的发病机理提供了有利的帮助。 目的: 1.筛选PDCD4相互作用蛋白 2.验证PDCD4相互作用蛋白 3.明确EIF3H在非小细胞肺癌细胞、肺癌组织中的表达及与临床参数之间的关系 4.初步探讨PDCD4与EIF3H在非小细胞肺癌细胞及肺癌组织中的表达相关性 5.筛选及初步验证EIF3H相互作用蛋白 方法: 1.筛选PDCD4相互作用蛋白 通过免疫共沉淀结合质谱结果、检索结果、亚细胞定位情况,筛选PDCD4可能相互作用的蛋白。 2.验证PDCD4相互作用蛋白 (1)通过免疫共沉淀实验从正反两面验证PDCD4与EIF3H相互作用; (2)利用免疫荧光技术检测PDCD4与EIF3H细胞定位情况。 3.明确EIF3H在非小细胞肺癌细胞、肺癌组织中的表达及与临床参数之间的关系 (1)通过Western Blot对非小细胞肺癌细胞中EIF3H蛋白表达检测; (2)通过免疫组化技术对肺癌组织中EIF3H进行检测,并运用统计学对临床参数进行统计分析。 4.初步探讨PDCD4与EIF3H在非小细胞肺癌细胞及肺癌组织中的表达相关性 (1)通过qPCR和Western Blot技术分别检测非小细胞肺癌细胞中PDCD4与EIF3H mRNA水平和蛋白水平的相互关系; (2)通过IHC检测PDCD4与EIF3H在肺癌组织中的表达关系; (3)利用单因素和多因素回归分析影响肺癌患者预后的相关因素。 5.筛选及初步验证EIF3H相互作用蛋白 (1)通过免疫共沉淀结合质谱结果、检索结果、亚细胞定位情况,筛选EIF3H相互作用蛋白; (2)通过免疫共沉淀实验从正面验证NUDT21是否为EIF3H的相互作用蛋白。 结果: 1.筛选出可能与PDCD4相互作用蛋白:EIF3H; 2.EIF3H为PDCD4相互作用蛋白; 3.与人永生化支气管上皮细胞16HBE比较,在H1299、H460、H1975细胞中EIF3H高表达,在SPCA1、A549细胞中,EIF3H的表达量并无明显差异。与癌旁比较,EIF3H在肺癌组织中高表达,差异具有统计学意义; 4.在非小细胞肺癌细胞中,PDCD4下调EIF3H mRNA及蛋白水平的表达;EIF3H上调PDCD4mRNA水平的表达,但PDCD4的蛋白水平并无明显改变。在肺癌组织中PDCD4以低表达为主,EIF3H以高表达为主。单因素回归分析显示:临床分期、N分期与肺癌患者预后相关,而多因素回归分析发现N分期可以作为独立预后因子; 5.NUDT11可能相互作用于EIF3H蛋白。 结论: 1.EIF3H相互作用于PDCD4。 2.EIF3H在肺癌组织中高表达,可能在肺癌中发挥某种生物学功能。 3.PDCD4可能在转录和翻译水平调控EIF3H的表达;EIF3H可能仅在转录水平对PDCD4的表达产生影响。PDCD4与EIF3H在肺癌组织中的表达呈显著负相关。N分期可以作为独立预后因子,可能与肺癌患者的预后相关。 4.NUDT11可能相互作用于EIF3H蛋白。