【摘 要】
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目的:探讨蛋白激酶Cζ(PKCζ)在表皮生长因子及其受体(EGF-EGFR)诱导的人类非小细胞肺癌(A549、H1299)趋化运动中所起的作用,并尝试为抗肺癌转移治疗寻找一个有效靶点。方法:
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目的:探讨蛋白激酶Cζ(PKCζ)在表皮生长因子及其受体(EGF-EGFR)诱导的人类非小细胞肺癌(A549、H1299)趋化运动中所起的作用,并尝试为抗肺癌转移治疗寻找一个有效靶点。方法:以人类非小细胞肺癌株A549、H1299为研究对象,利用Western blotting和RT-PCR验证EGFR和PKCζ在其中的表达;利用EGF和SDF-1α/CXCL12为诱导物对A549进行趋化实验,比较两种诱导物对A549趋化能力的影响;使用针对不同PKC亚型的抑制剂和PKCζ假底物处理细胞,在有或者无EGF诱导下进行趋化实验,无EGF刺激作为阴性对照,比较不同亚型PKC分子在趋化运动中的作用;选用免疫荧光染色技术分析细胞中PKCζ的迁移以及丝状肌动蛋白(F-actin)的聚合情况;用流式细胞仪分析在PKCζ假底物处理前后细胞表面EGFR表达水平;通过Alexa Fluor 568甲醇抽提/phalloidin细胞染色,并用578nm、600nm的激发光和发射光进行荧光定量分析F-actin含量;细胞用抑制剂和假底物处理后,在有或无EGF刺激下贴壁相应时间,计数黏附细胞数目。结果:EGF对A549细胞诱导的趋化指数比CXCL12诱导的高出近3.6倍;在各种PKC分子的抑制剂中,Chelerythrine chloride(所有PKC分子的抑制剂)及myr-假底物对EGF诱导的趋化运动的阻断具有剂量依赖性,但其他抑制剂仍可以使EGF诱导出趋化运动;EGF诱导的信号转导通路导致F-actin的聚集,Chelerythrine chloride和myr-假
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